| 核酸外切酶 III来源于E.coli，具有3'-5'外切酶活性，它作用于双链 DNA，从 3' OH 末端方向逐步切去单核苷酸；每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。该酶的最佳底物为平末端、5'突出末端双链DNA分子，但也可作用于双链DNA的缺刻处，从3'降解DNA分子，释放5'单核苷酸。对于3'突出末端，尤其是多于4nt的几乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂键。核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。另外，核酸外切酶 III还具有脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性、RnaseH活性和3' 磷酸酶活性。 |
组分 |
| 名称 | 数量 | | Exonuclease III (100 U/μl) | 50 μl | | 10X Exonuclease III Buffer | 1 ml | |
应用 |
- 非定向巢式缺失
- 定点突变
- 链特异性探针的制备
- 制备用于双脱氧测序的单链底模板
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单位定义 |
| 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟 催化E.coli DNA 产生 1 nmol 酸可溶性产物所需要的 量定义为一个活性单位。 |
1X Exonuclease III Buffer |
| 10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl2，1 mM DTT。 |
热失活 |
| 70°C 20min。 |
储存 |
| 置于-20°C，可保存3年。 |
实例 |
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| Fig 1:分别用不同的内切酶切质粒DNA产生5'突出末端、平末端和3'突出末端产物，然后用Exonuclease III（2.5U）分别酶切这三种产物（5 μg），将酶切产物琼脂糖电泳。泳道1：5'突出末端产物；泳道2：平末端产物；泳道3：3'突出末端产物；M：DNA Marker 10000。 | ? | Fig 2:EcoR V酶切pUC57质粒获得酶切产物，然后分别用不同量的Exonuclease III酶切该产物获得渐进缺失产物。泳道1：对照（不加Exonuclease III); 泳道2：0.312U Exonuclease III; 泳道3：0.625U Exonuclease III; 泳道4：1.25U Exonuclease III; 泳道5：2.5UExonuclease III; M：DNA Marker 10000。 |
