冻干LAMP橙绿变色扩增试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达10⁹~10¹⁰倍。 LAMP检测方法分为多种，包括染料法、浊度法、电泳法以及我司最新开发的TaqMan荧光探针法。我司推出基于LAMP常用检测方法的冻干LAMP检测通用试剂盒，该系列产品为冻干制品，相对于市面上的液体型产品更加稳定，灵敏度更高，操作更加方便，通常在30min内完成检测。
LAMP变色扩增试剂盒包括：冻干LAMP-HNB变色扩增试剂盒、冻干LAMP橙绿变色扩增试剂盒、冻干LAMP浊度扩增试剂盒和冻干LAMP-TaqMan扩增试剂盒。其中羟基萘酚蓝（HNB）是一种金属离子指示剂，HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色，随着反应的进行，Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀，羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色，而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色；而橙绿变色染料（OG Dye）则可与LAMP扩增产物结合成明显的肉眼可见的荧光绿色，阴性反应则为橙色；浊度法则是由浊度仪检测或肉眼观察LAMP剧烈反应产生的焦磷酸镁沉淀而判断反应结果;而LAMP-TaqMan则是由荧光检测仪器实时分析反应而判读结果。

LAMP方法比较

?	LAMP TaqMan	LAMP-橙绿变色	LAMP-HNB	LAMP-浊度
变色现象	荧光探针切割	橙色变绿色	紫罗兰色变天蓝色	无色变白色浑浊
检测设备	定量PCR仪或恒温荧光检测仪	肉眼可见	肉眼可见	肉眼可见或浊度仪
区分度	极易判读	极易判读	可以判读	相对不明显
灵敏度	单Copy	10Copy	10-50Copy	10-100拷贝
特异性	高特异	比较特异	一般	一般
反应温度	60~63℃	60~65℃	60~65℃	60~65℃
反应时间	15~25min	20~40min	20~40min	20~40min
反应用酶	Bst5.0	Bst4.0	Bst4.0	Bst4.0
综合推荐	★★★★★	★★★★★	★★★	★★
试剂开发难度	较易	较难	非常难	较难

储存

所有制品为冻干形式，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

实例

以检测非洲猪瘟病毒（ASFV）为例，以标准质粒为模板，分别用橙绿变色、HNB显色和浊度方法检测，结果如下图。

LAMP扩增试剂盒

LAMP引物设计与实验指南

注意事项

(1). 为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。
(2). 实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1 ng~100 ng），可先进行预实验确定模板量。
(3). 各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
(4). 实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。