产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 血清血浆miRNA含量较组织细胞或外周血低，市面上现有的试剂盒提取血清血浆小RNA的得率普遍较低，因此很难用于后续的定量检测。新海基因血清血浆miRNA提取试剂盒通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在10min左右完成小RNA的提取，是目前提取小RNA（<200nt）操作步骤最简单、重复性最好、小RNA产率最高的方法。使用该试剂盒提取的小RNA（Small RNA）中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA，可直接用于后续的反转录、Northern 杂交、测序等应用。 | |||||||||||||||||
组分 | |||||||||||||||||
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储存 | |||||||||||||||||
| 室温可保存2年。 | |||||||||||||||||
常见问题 | |||||||||||||||||
| (1) 由于血清血浆中的miRNA含量极低，提取的miRNA浓度通常在5 ng/μl以下，因此难以用常规的NanoDrop测量浓度，建议直接使用10μl进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小RNA，该浓度下的miRNA Copy数足以进行下游检测。 (2) 由于血清血浆中miRNA的含量低，为了获得更可靠的实验数据，建议使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA的下游检测。本试剂盒提取的miRNA并不限于其它检测方法和用途，包括SYBR Green法检测、二代测序、芯片等检测领域。 (3) 新海基因的D1803血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒为血清血浆专用，不可用于细胞和组织的miRNA检测实验。使用D1803获得的反转录产物仅可使用本公司的HG TaqMan miRNA qPCR试剂盒（货号：TAPXXXXX）。在使用D1803反转录条件下，应用货号为TAP01511检测内源hsa-miR-16， Ct值通常在24左右。 (4)外源性内参可单独订购cel-miR-39 标准品（货号：B1805），每个样品每次提取cel-miR-39的使用量为50fmol。 (5)抗凝血剂要避免使用含有肝素的凝血管，因为肝素会抑制反转录 (reverse tranion) 和聚合酶 (polymerase) 的反应。 | |||||||||||||||||
实例 | |||||||||||||||||
| 1.不同血清体积对定量PCR的影响，以hsa-miR-16 qPCR为例，反转录应用血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒（D1803），定量PCR试剂盒用TAP01511。 | |||||||||||||||||
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| 2.应用该血清血浆miRNA提取试剂盒（B1804）从500μl的血清样本中获得小RNA，血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒（D1803）进行反转录，然后用HG TaqMan miRNA定量试剂盒分别检测不同的8种miRNA表达。 | |||||||||||||||||
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