末端转移酶(TdT)是一种不依赖于模板的DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子 均可作为TdT的底物,加尾长度可达5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选,使其可以在45°C高温下反应,从而避免因DNA二级结构造成的加尾效 率下降。优化的活性中心结构,使其对模板底物结合能力更强,底物加尾比例更高。该末端转移酶(TdT)广泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修饰碱基(如 ddNTP,DIGdUTP)标记DNA 3’末端、TdT介导的dUTP 缺口末端标记技术(细胞凋亡的原位检测)等试验。 |
组分 |
组分名称 | 数量 | Terminal Transferase (20 U/μl) | 50 μl | 10×TdT Buffer | 1 ml | |
应用 |
- 寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记
- DNA末端加尾(DNA tailing)
- 5’-RACE
- 合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链
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活性定义 |
37℃ 60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位 |
储存 |
-20℃可保存3年。 |
热失活 |
75°C 20min。 |
注意事项 |
1、适量EDTA可使Terminal Transferase的活性丧失。 2、金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对Terminal Transferase活性具有抑制作用。 |
功能测试 (该实验结果来自实验室,未经允许,不得转载) |
1. TDT不同底物的加尾效率分析 | | 2. 不同酶量和不同温度下加尾长度分析 |
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