| 9N (exo-) DNA Polymerase 是9N DNA聚合酶中的突变体，具有较强的掺入修饰底物的能力，如：ddNTP、rNTP 和acyNTP，因此其适用于核糖核酸置换法DNA测序、ddNTP或acyNTP的链终止法测序或SNP分析。该酶来源于E. coli菌株，此菌株含有从Thermococcus species 9°N-7 中克隆的经过基因工程改造的9°N (D141A/E143A/A485L) DNA聚合酶基因。 |
主要特征和应用 |
- 提高了修饰核苷酸的掺入能力
- 部分核糖核酸置换法测定 DNA 序列
- ddNTP 或 acyNTP 的链终止法用于测序或 SNP 分析
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组分 |
| 组分名称 | 数量 | | 9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl) | 250 μl | | 10×HG PCR Buffer 6 | 1 ml×2 | |
单位定义 |
| 一个活力单位即在在74°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 |
储存 |
| -20℃可保存3年。 |
使用方法 |
按下表配制反应液:
9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl) 1.25 μl
10×HG PCR Buffer 6 5 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each) 2 μl
模板DNA X
Primers（10 μM） 0.25~1 μl
ddH2O Up to 50 μl
*1模板DNA用量参数(50 μl反应体系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl | PCR扩增循环参数 | 循环数 | 温度 | 时间 | | 1st Cycle | 95°C | 2min | | 25-35 Cycles | 95°C | 20s | | Tm | 20s | | 72°C | 0.5kb/min | | Last Cycle | 72°C | 2min | | |
