RAPA HiFi DNA聚合酶-上海雅吉生物科技有限公司

RAPA HiFi DNA聚合酶，其来源于高保真DNA聚合酶，并加入了增强的延伸结构，使其具有超保真性能（~280倍Taq）、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力，使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的延伸速度。该酶具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活性，产物为平末端。

主要特征

超保真扩增：~280倍Taq的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
快速扩增：具有6kb/min的扩增能力。
长片段扩增：质粒、λDNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb，基因组可以有效扩增>8 kb，cDNA可以有效扩增>8kb。

组分

组分名称	500U
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl)	100 μl
2xRAPA HiFi Buffer	1 ml×5

单位定义

一个活力单位即在在74°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

长期储存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3个月）保存。

使用方法

1.按下表配制反应体系并混合均匀：
2xRAPA HiFi Buffer 12.5 μl
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl) 0.25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 0.25 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
*模板DNA 1-250 ng
ddH₂O up to 25 μl

*模板DNA用量参数(25 μl反应体系,目的片段≤20kb)
     5-250 ng Genomic DNA
     0.1-10 ng Plasmid DNA
     1-2 μl cDNA from RT reaction

2. PCR扩增循环参数

（1）扩增片段<5kb时采用如下程序

循环数	温度	时间
1st Cycle	95°C	1min
25-35 Cyclese	95°C	30s
	50~60°C	30s
	72°C	6kb/min
Last Cycle	72°C	2min

（2）扩增片段>5kb时采用如下程序

循环数	温度	时间
1st Cycle	95°C	1min
25-35 Cyclese	95°C	30s
	50~60°C	30s
	72°C	2-3kb/min
Last Cycle	72°C	2min

3.注意事项

（1）当模板GC含量>65%时，请添加5×Q-Solution（Cat. No.: A3002）。
（2）当扩增片段<1kb时，延伸时间可直接使用15s，当扩增片段>5 kb时，按照2-3 kb/min的延伸时间进行设置，能获得更高的产量。
（3）由于不同的PCR管其导热性能有所不同，通常PCR采用25 μl体系可以获得更高的产量。