产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
RAPA3G 动物组织直扩 PCR 试剂盒
Cat. No.: YS0609 80T(50 pL 体系)
描述：RAPA3G DNA 聚合酶为经电子重构架的第三代 Taq DNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的杂质耐受性、 长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得 RAPA3G 系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯 化步骤。 该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、 5’-3’的外切 酶活性、3’-5’的外切酶活性，产物部分带有”A“尾巴，部 分为平末端，因此产物可用于 TA 克隆或平端克隆。
特点和用途：
(1)高杂质耐受性：该 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含 量较高的动物组织材料进行 PCR 扩增，无需基因组提取。
(2) 高效的快速 DNA 释放剂：尽管该 PCR Mix 可以直接 使用组织细胞材料进行扩增，但我们仍然推荐采用 DNA 释 放剂进行样本的快速前处理(约需要 5min，可高通量操作)。 DNA 释放剂的前处理，使得制备的DNA 模板可以进行多次、 多基因扩增，并长期保存 DNA，经 DNA 释放剂处理的样本， 在室温条件下放置 1 个月， 无任何后续影响，-20 可长期保 存。
(3) 快速 PCR：该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，可显 著的缩短 PCR 的扩增时间，在常规测试条件下， 10s 的延 伸时间可完成 1kb 的基因组 DNA 扩增。
(4) 粗制样品的扩增能力：扩增能力>4kb。
(5)高保真性能： 该制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保 真 DNA 聚合酶， 因此其具有一定的保真性能(经蓝白斑测 试，其保真性能约为 Taq DNA 聚合酶的56 倍)。
(6) 热启动， 防止非特异性扩增： RAPA3G 系列产品均采 用 HaiGene 专有的热启动技术，确保 50 度以下完全无活性， 仅有 95 度加热 5min 以后才能恢复其活性，因此可最大限度 的提高扩增的特异性， 减少非特异性产物的产生。
包装：
| 2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 快速 DNA 释放剂 A 快速 DNA 释放剂 B | 1ml×2 20 ml 20 ml |
注意：2×RAPA3G PCR Mix (with Dye)制品可单独订购，货 号， A0607。
储存： 长期储存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置 于 4°C (3 个月)保存。
使用方法
1. DNA 释放
(1) 采用加热法：取 2- 10 个毛发囊、1- 10mg 动物组织等 材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 pl 快速 DNA 释放剂 A，于 PCR 仪中 98°C 加热 5min，加热完毕后加入 50 pl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
(2) 采用钢珠研磨法：取 1- 10mg 动物组织等材料， 放入 到 2ml EP 管中，加入 250 pl 快速 DNA 释放剂 A 和 2-3 粒 钢珠，研磨 1-2min 成浆体装。 研磨完毕后加入 250 pl 快速 DNA 释放剂 B ，混合均匀， 即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反应体系并混合均匀： 2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 pl
上游引物(10 pM)
下游引物(10 pM)
步骤 1 制备的模板 DNA 2 pl
ddH2O
注意：当扩增片段>5kb 时，引物用量调整为 0.25-0.5pl。
3. PCR 扩增循环参数
| 循环数 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95°C | 5min |
|
| 95°C | 20s |
| 25-40 Cycles | 50~60°C 72°C | 20s 4-6kb/min |
| 末延伸 | 72°C | 2min |
请注意：(1) 该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩 短，否则 DNA 聚合酶无法恢复活性。(2) 当扩增片段<1kb 时， 延伸时间使用 15s；扩增片段 1-2kb 时,延伸时间使用 45s ，扩增片段 2-3kb 时,延伸时间使用 1min ，当扩增片 段>3kb 时，请按照 2kb/min 的延伸时间进行设置。(3)尽管 该酶具有 6kb/min 的延伸速度， 但按照 2kb/min 设置延伸时 间的条件下，能获得最高的产量。
3. 注意事项： (1) 当模板 GC 含量>70%时，请添加
5× Q-Solution (Cat. No.: A3002) 。(2)当采用全血、血浆等 蛋白含量极高的样本时， 扩增完毕后可能会有变性的蛋白沉
淀，请离心后再进行点样和电泳。
