产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
描述：RAPA HiFi DNA 聚合酶，其来源于高保真 DNA 聚合 酶， 并加入了增强的延伸结构， 使其具有超保真性能(~280 倍 Taq)、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力， 使用 该酶可轻松扩增 8kb 的基因组 DNA 、20kb 的 λDNA、8kb 的 cDNA。该酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、强 3’-5’的外切酶活性， 产物为平末 端。
包装：
1ml
1 ml×10
特点和用途
(1) 超保真扩增： ~280 倍 Taq 的保真性能， 是载体构建、点 突变、 NGS 模板扩增、基因合成的最佳用酶。
(2) 快速扩增： 具有 6kb/min 的扩增能力。
(3) 长片段扩增： 质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩 增>20 kb，基因组可以有效扩增>8 kb ，cDNA 可以有效扩 增>8kb。
储存： 长期储存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置 于 4°C (3 个月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀：
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
| 上游引物(10 μM) | 1 μl |
| 下游引物(10 μM) | 1 μl |
| 模板 DNA | 1-250 ng |
| ddH2O | up to 25 μl |
*模板 DNA 用量参数(25 μl 反应体系)
5-250 ng Genomic DNA
模板 DNA
(目的片段≤20kb)
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 扩增循环参数
(1)扩增片段<5kb 时采用如下程序
| 循环数 | 温度 | 时间 |
| 1st Cycle | 95°C | 1min |
|
| 95°C | 30s |
| 25-35 Cycles | 50~60°C 72°C | 30s 6kb/min |
| Last Cycle | 72°C | 2min |
| (2)扩增片段>5kb 时采用如下程序 | ||
| 循环数 | 温度 | 时间 |
| 1st Cycle | 92°C | 1min |
|
25-35 Cycles | 92°C 50~60°C 72°C | 10s 30s 2-3kb/min |
| Last Cycle | 72°C | 2min |
3. 电泳： 1% 琼脂糖凝胶电泳， 上样 5 μl，电泳结束在紫外 灯下检测条带。
4. 注意事项： (1) 当模板 GC 含量>65%时，请添加
5× Q-Solution (Cat. No.: A3002)。(2)当扩增片段<1kb 时， 延伸时间可直接使用 15s ，当扩增片段>5kb 时，按照 2-3kb/min 的延伸时间进行设置，能获得更高的产量。(3) 由于不同的 PCR 管其导热性能有所不同， 通常 PCR 采用 25μl 体系可以获得更高的产量。
