植物铵态氮试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
氮素是构成生物体的一种必需元素,自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮,经过硝化微生物的作用转化成硝态氮,后者被植物或微生物同化成有机氮化物,植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
测定原理
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热,经氧化脱氨变成相应的α-酮酸,酮酸进一步脱羧变成醛,水合茚三酮则被还原,在弱酸环境中,还原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反应, 缩合生成蓝紫色物质,在580nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加0.5mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体25mL×1瓶,4℃保存。
样本处理
按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室温匀浆后于25℃,12000g离心10min,取上清待测。
测定操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) |
| 200 |
蒸馏水(μL) | 200 |
|
试剂一(μL) | 300 | 300 |
试剂二(μL) | 10 | 10 |
充分混匀,沸水浴5min后自然冷却10min | ||
试剂三(μL) | 500 | 500 |
充分混匀,于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定580nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管 |
注意:空白管只需测定一次。
计算公式
标准曲线:y=0.1535x-0.0279,R2=0.999NH4+—N含量(μg/g 鲜重)=(△A+0.0279)÷ 0.1535×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 32.9×(△A+0.0279)÷W
V反总:反应总体积,1.01mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项
1. 提取好的待测液尽快测定,低温保存不得超过24小时。
2. 沸水浴时间不宜过长,否则会对测定结果有影响。
3. 显色后20min内完成测定。
4. 最低检出限为18μg/g。