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96样	￥ 800	1

植物类黄酮（Flavonoid）含量

规格：微量法 96样

检测原理：硝酸铝法

编号：YS10072S

检测波长：510nm

线性范围：0.03~0.6 mg/mL(芦丁)

检出限：0.01 mg/mL(芦丁)

注意：

1、正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定；

2、为了您的安全和健康，请佩戴好防护用具；

测定意义：

植物类黄酮，即黄酮类化合物（Flavonoid）。属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

测定原理：

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备仪器和用品：

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、离心机、酶标仪、96孔板、可调式移液器、60%乙醇、蒸馏水。

试剂清单：

试剂名称	规格	数目	贮藏
试剂一	液体 1mL	x1	4℃,避光
试剂二	液体 1mL	x1	4℃
试剂三	液体 10mL	x1	4℃
标准品	粉剂	x1	4℃,避光	2mg 芦丁标准粉剂

样品处理（按照步骤依次操作）：

一、组织样本

1、将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后；

3、称取约0.02g，加入2mL 60%乙醇，60℃振荡提取2h；

4、然后离心 10min（10,000g离心力 25℃），取上清待测。

二、液体样本

澄清样本可直接检测，若浑浊则离心取上清检测；

实验准备：

1、酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm；

测定操作：

1、在96孔板中依次操作

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本待测液	100	100
蒸馏水	-	20
试剂一	10	-
混匀，25℃静置 6min
试剂二	10	-
混匀，25℃静置 6min
试剂三	80	80
混匀，25℃静置15min，测定510nm处吸光值A ΔA=A_测定-A_对照

注意：

1、若ΔA＞1.5则超出试剂盒线性范围，建议将样本稀释后测定，稀释倍数D代入公式计算；

2、若ΔA＜0.02可能样本含量较低或有干扰，建议尝试增加样本量后再测定，代入公式重新计算；

结果计算：

一、按照样本质量计算

植物类黄酮含量(mg/g)= [(ΔA+0.0237)÷2.4474]÷(W÷V)×D

=0.8172×(ΔA+0.0237)÷W×D

二、按照蛋白浓度计算

植物类黄酮含量(mg/mg prot)= [(ΔA+0.0237)÷2.4474]÷Cpr×D

=0.4086×(ΔA+0.0237)÷Cpr×D

三、按照液体体积计算

植物类黄酮含量(mg/mL)= [(ΔA+0.0237)÷2.4474]×D

=0.4086×(ΔA+0.0237)×D

W：样本质量，g；

V：加入提取液体积，2mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

D：额外稀释倍数，未稀释即为1；

附：标准曲线的绘制（选做）

1、标准品管中加入2 mL 60%乙醇充分溶解即为1 mg/mL 芦丁标准溶液；

2、将标准品(1mg/mL) 使用60%乙醇稀释为0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL；

(也可根据自身实验需求调整标准品浓度)

3、依据以下测定步骤操作，根据结果绘制标准曲线

1) 在96孔板中依次操作

试剂名称（μL）	标准管	对照管
标准品	100	100
蒸馏水	-	20
试剂一	10	-
混匀，25℃静置 6min
试剂二	10	-
混匀，25℃静置 6min
试剂三	80	80
混匀，25℃静置15min，测定510nm处吸光值A ΔA=A_标准-A_对照，每个浓度的标准品需对应设置一个对照管

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