规格 | 价格 | 库存 |
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50管/24样 | ¥ 600 | 10 |
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理:
PPO能够催化邻苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体,60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体,40mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体,10mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)或果汁样本的处理:
按照血清(浆)或果汁体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)或果汁加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至525nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在EP管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 180 |
|
煮沸的样本 |
| 180 |
试剂一 | 720 | 720 |
试剂二 | 180 |
|
蒸馏水 |
| 180 |
37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确水浴10min后,95℃水浴5min
充分混匀,10000g,25℃离心10min,取上清,525nm处检测测定管和对照管吸光度。ΔA=A测定管-A对照管。
注意:煮沸样本的操作:取300μL离心上清于EP管中,进行5min 95℃水浴处理;每个测定管需要设一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃水浴处理。