H9细胞完全培养基

货号：H9Med-001

规格：500mL

储存条件：基础培养基2 ~ 8℃，添加剂-80 ~ -20℃；混匀后2 ~ 8℃，2周内使用完毕。

产品简介：

H9细胞培养基是雅吉生物开发出的一种适用于无饲养层培养、化学成分明确、并且不含动物源蛋白的人多潜能干细胞（hESC/hiPSC）完全培养基。H9细胞培养基是在James Thomson实验室开发的Essential 8培养基的基础上，改良研发出的最新型多潜能干细胞完全培养基。hESC/hiPSC在H9细胞培养基中可以快速增殖，而分化的细胞则无法在该培养基中生长，从而选择性扩增并获得高纯度多潜能干细胞。

产品内容：

试剂准备：

H9细胞完全培养基：将H9细胞添加剂加入H9细胞基础培养基中形成H9细胞完全培养基（推荐每2mL添加剂与50mL基础培养基混合）。

H9细胞完全培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

疑难解答：

•是否还需要往H9细胞完全培养基中补充或添加成分？

不需要。H9细胞培养基中各个成分的质量和浓度都经过了最优化实验，完全支持人ESC/iPSC的长期培养，您无需再自行添加。

•培养基中有沉淀状物质是否是质量问题？

添加剂在解冻过程中，若有少量沉淀析出，属于正常现象，不影响使用，请充分混匀后与基础培养基混合。但添加剂不能在37℃解冻，否则会析出大量沉淀，影响培养基的效价。如果培养基中出现大量沉淀，请不要使用。

•是否能在37 ℃反复水浴H9细胞完全培养基？

不能。频繁地在4℃和37℃之间转换会导致H9细胞完全培养基中含有的因子失活，H9细胞完全培养基在使用前平衡至室温即可。

• H9细胞在传代后不贴壁怎么解决？

造成H9传代后不贴壁的最可能的原因：

① 细胞消化时间不合适；②消化后吹打次数不合适，使得完成传代后细胞集落过大或过小。

• H9分化怎么处理？

① 细胞在刚复苏或传代时，小的细胞团不呈现标准的克隆形态，培养几天或传代后可恢复。②如果H9分化的表现为干细胞克隆形态良好，克隆周边出现散在的分化细胞，可通过高比例传代（≥1:10），使得分化细胞的密度减少，低密度的分化细胞可被H9培养体系筛选去除，如未完全去除，可用细胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H9分化的表现为克隆内部松散，边缘不平滑，在分化比例小或分化不严重的情况下，可通过连续传代2 ~ 3次恢复，如果分化严重，建议弃除。

• 细胞复苏率低是什么原因？

细胞复苏需使用H9细胞复苏培养基，可大大提高细胞的复苏效率。复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，

导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。

H9细胞铺底工作液

货号：H9Med-CA006

规格：100mL

储存条件：基础培养基2 ~ 8℃，添加剂-20℃；2 ~ 8℃解冻，禁止反复冻融。

产品简介：

H9细胞铺底工作液是使用基质胶配制好的即用型工作液，可以为人胚胎干细胞（ES）无饲养层培养（feeder-free culure）提供理想的底物支持。与H9细胞完全培养基联合使用，可以稳定维持人ES在体外培养的多潜能性、快速增殖能力和正常的核型。

产品内容：

H9细胞铺底工作液-添加剂分装：

1. 提前一天在4℃冰箱中解冻H9细胞铺底工作液-添加剂，

2. 提前准备无菌干燥的移液管或枪头，EP管置于-20℃冰箱预冷，

3. 将化冻的H9细胞铺底工作液-添加剂，置于冰上放入生物安全柜，

4. 用预冷的移液管或枪头将H9细胞铺底工作液-添加剂按1mL/支分装到EP管中，并放入-20℃保存。

工作液配制：

1. 取分装好的1mL H9细胞铺底工作液-添加剂放入4℃冰箱解冻，

2. 30min后，将解冻的H9细胞铺底工作液-添加剂加入到9mL基础液中，并充分混匀，

3. H9细胞铺底工作液推荐使用量：

4. H9细胞铺底工作液完全覆盖瓶/皿底，置于37℃培养箱2h或过夜。

5. 细胞复苏时，在铺瓶/皿前，需将铺底工作液吸出。

 Y27632说明书

货号：H9Med-CA005

规格：1mg（10mM）

储存条件：-20ºC

产品描述:

独家引进，可以阻止人胚胎干细胞（hES）因分离诱导的细胞凋亡，在不影响hES的自我更新或者多潜能特性的前提下改善分离的hES细胞的存活率和克隆效率。

建议将该溶液1000倍稀释（10μM浓度）加入H9细胞完全培养基，混合均匀。

建议分装后-20ºC避光保存，避免反复冻存，至少可存放6个月。

注意事项：

♦本产品为化学试剂对人体可能有害，请做好安全防护工作，避免直接接触皮肤。

♦本产品仅用于科研用途，禁止用于人身上。

H9细胞消化液

货号：H9Med-CA003         

规格： 500mL           

储存条件：2 ~ 8 ℃

产品简介：

H9细胞消化液可以应用于非饲养层依赖的H9传代，该工作液属于非酶类温和消化液，对细胞损伤小且消化时间适中便于操作，是一种已被普遍使用的消化液，可与H9培养基搭配使用。

操作说明：

1. 将H9完全培养基取出并平衡至室温，取出包被过Matrix的培养皿/瓶，吸去包被液并加入适量完全培养基，置于5% CO₂的37℃恒温细胞培养箱中。

2. 吸走待传代细胞培养皿/瓶中的iPS完全培养基，并且加入无钙镁的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA传代工作液使之完全覆盖皿/瓶底。

4. 室温放置5 ~ 8 min或37℃恒温细胞培养箱中孵育3 ~ 5 min，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底，克隆内部大部分细胞间出现间隙但尚未相互分离，肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白，表明细胞消化时间理想。

5. 吸去传代工作液，即刻加入新鲜的H9完全培养基，用移液器扇形吹打培养皿/瓶底，使皿/瓶底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀。

  注：吹吸的力度要轻柔，吹打脱落和吹吸混匀的次数总共不超过10次为宜。吹打过度导致大量单细胞出现是造成细胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落，需延长消化时间。

6. 显微镜下观察细胞呈4 ~ 20个细胞大小的团块，水平十字摇匀。

7. 将细胞置于5% CO₂的37℃恒温培养箱培养。

8. 每天换液直至达到可以传代的标准。