产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物，对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶（ADH）的家庭成员之一，广泛存在于原核和真核生物中，该酶能利用NAD+作为辅酶，将有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途径中的关键酶。
测定原理：
甲醛脱氢酶催化甲醛和NAD+产生NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入15mL水溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL水溶解待用。
试剂四：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
FDH提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作表：
1、 分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
在比色皿中加入如下试剂
|
| 测定管 |
| 样本（µL） | 100 |
| 试剂一（µL） | 550 |
| 试剂二（µL） | 250 |
| 试剂三（µL） | 50 |
| 试剂四（µL） | 50 |
混匀，于340nm下测定初始吸光值A1与5min后的吸光值A2，△A=A2-A1。
若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。
FDH酶活计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
（2）按样本质量计算
酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
（3）按照细胞数量计算
酶活定义：每104个细胞每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
（4）按液体体积计算
酶活定义：每mL样本每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
：NADH微摩尔消光系数，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
