人类嗜T淋巴细胞病毒2型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
50T	￥ 4490	10

产品及特点

人类嗜T淋巴细胞病毒2型（HumanT-lymphotropicVirus2,HTLV-2）是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的RNA病毒，HTLV-2和HTLV-1同源性达到70%，也是艾滋病毒(HIV-I)的远亲。该病毒在体内主要感染CD4+T淋巴细胞，可引起成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤等疾病，主要通过输血、针头、性行为、母子传染，对人类健康构成威胁，因此快速灵敏检测HTLV病毒具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测人类嗜T淋巴细胞病毒2型的试剂盒，它具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2.引物和探针经过优化，分析灵敏性高。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据HTLV病毒2型高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。

5.既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6.本产品足够50次 20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。

7.本产品只能用于科研。

成分	编号	五孔盒包装
探针法qRT-PCR缓冲液	190504a	500μL（白盖）
探针法qRT-PCR酶混合液	190504b	100μL（红盖）
荧光PCR专用模板稀释液	180701	1mL（绿盖）
HTLV病毒2型探针法qRT-PCR 引物-探针混合液	15-87820yp	150μL（棕色管）
HTLV病毒2型探针法qRT-PCR 阳性对照(1×10E7拷贝/μL)	87820pc	50μL（黄盖）

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂样品RNA，超纯水。

使用方法

一、稀释标准曲线样品（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1.标记6个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2.用带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。

3.在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释得)，充分震荡1分钟，得 1×10E5拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

5.换枪头，在4号管中加入5μL1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用

6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品RNA的制备

7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的是PC（样品制备阳性对照）和NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为PC另外用水作为NC。

8.用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒RNAout或免提取核酸释放剂。

三、ProbeqRT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）

9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板）6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个 RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分/每管	样品管 N+2个	RT-PCR 阴性对照	标准曲线样品管（1-6管）
探针法qRT-PCR缓冲液	10μL	10μL	10μL
探针法qRT-PCR酶混合液	2μL	2μL	2μL
HTLV病毒2型探针法qRT- PCR引物-探针混合液	3μL	3μL	3μL
N+2个待测RNA样本	5μL	不加	不加

自备超纯水

不加

5μL

不加

第 6步所得标准曲线样品稀释液

（1-6号）

不加

5μL（1号样到

1号管，2号样

到2号管…）

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：

过程	温度	时间
逆转录	50℃	20min
预变性	94℃	10min
RT-PCR反应（45个循环）	94℃	30sec
	58℃	1min（采集FAM通道的荧光信号）

五、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于38。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于38则为阳性。如果在38-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。

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