T3体外转录试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
50T	￥ 1990	200

产品及特点	本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T3 启动子的模版DNA，以 NTP 为底物，从 T3 启动子下游开始合成与模板 DNA 中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。本产品具有下列特点： 1. 即开即用，用户只需提供含 T3 启动子的 DNA 模板即可以进行体外转录实验，不需单独准备每一个成份。 2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。 3. 模板 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。 4. 可以合成的 RNA 的最佳长度在 20 nt 到 5000 nt 之问。 5. 产品配方经过精心优化，每μg DNA 模板可以合成 2-6 μg RNA。 6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA- 蛋白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。
规格及成分		成份	编号	十孔盒包装
		2×T3 转录预配液	91108a	0.5 mL（本色盖）
		T3 RNA 聚合酶混合液	120309	50 μL（红色盖）
		RNase-free 水	80403	1 mL（亮黄盖）
		使用手册	91108sc	1 份
运输及保存	低温运输，-20℃保存, 有效期一年。
自备试剂	如果需要去除转录产物中的DNA 模板，则需要RNase-free DNase 、Tris 饱和酚、氯仿、微量核酸沉淀剂、RNase-free 75%乙醇（均可从本公司另购）
使用方法	一、制备 DNA 模板 PCR 片段和质粒 DNA 都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的 DNA。如果是质粒 DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的 DNA 序列的上游必须有 T3 启动子。如果模板是 PCR 产物，则可以在设计引物时将 T3 启动子序列（5’AATTAACCCTCACTAAAGG 3’）加上。如果是将 DNA 片段克隆到载体上，则需要选择有 T3 启动子的载体，并且克隆位点必须位于 T3 启动子下游。三是需要转录的 DNA 序列的下游端最好不要是 3’突出。如果是 3’突出（如选择了Pst I 来线性化质粒），则最好用 T4 DNA 聚合酶修平。四是必须保证 DNA 模板中没有 RNase。由于提取质粒 DNA 的过程中

一般要使用大量的RNase A，因此质粒 DNA 一般都有严重的 RNase A 污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒 DNA。并且加入少量总 RNA 一起保温，然后电泳检测 RNA 是否被降解，以此判断纯化的DNA 模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应

但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。

1.在体外转录结束后，在反应体系中加入 3-5 U 自备的 RNase-free DNase。 2.37℃保温 15-30 分钟。

3. 补水到 100 μL，

4. 用自备的等体积（100 μL）的Tris 饱和酚-氯仿抽提一次去除残留的DNase

和 RNA 聚合酶。

5. 在上清中加 200 μL 自备的微量核酸沉淀剂（CAT#50903；用前需要摇晃混匀），振荡后 15000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清。

6. 加入 1 mL 75%乙醇，震荡 10 秒后 15000 rpm 离心 3-5 分钟，弃上清。

7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。

8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除 DNA 模板后的 RNA。可溶于 RNase-free

水中后立即使用或放-80℃长期保存。

答客问

1、没有 RNA 产物。最常见原因是 DNA 模板有 RNase 污染，测试方法是将纯化的有两条典型 RNA 条带的总 RNA 跟模板 DNA 一起保温，再检测 RNA 是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有 RNase inhibitor，如果模板 RNase 污染严重，可能需要用户补加 RNase inhibitor。