Bst2.0 HNB变色扩增试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

在核酸分子的恒温扩增过程中，无论采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等扩增技术，这种高速度的扩增特性，均不可避免的引起假阳性扩增。这种假阳性的扩增情况在LAMP扩增中表现尤为明显，由于LAMP扩增用到很高浓度的引物，因此难免保证有少量错配和引物Dimer，这些轻微的污染都会导致在LAMP高速扩增中造成假阳性。HaiGene优化的反应缓冲液，配合独有的显色技术和阴性控制技术建立的预混恒温mix系列产品，可高灵敏度、高特异性的用于LAMP HNB变色、LAMP红黄变色、LAMP OG变色、 LAMP 浊度分析、LAMP SYBR Green荧光检测、HDA荧光检测、RCA荧光检测、CPA荧光检测、SMAP荧光检测的扩增反应。在LAMP扩增实验中，与其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能， Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的扩增速度和杂质耐受性。
Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶对dUTP底物的超强识别能力，扩增反应所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代，因此扩增产物均包含dUTP，在配合热敏UDG的情况下，气溶胶污染物，将会在起始反应阶段被彻底清除。而后续热敏UDG在65℃条件下3min内，完全不可逆失活；从而既能消除污染物，又能保证核酸正常扩增。因此，应用该试剂能大大降低LAMP反应中由于气溶胶污染造成的假阳性信号。

使用特征

	Bst 4.0 MasterMix
特点	单组分预混
扩增用酶	Bst3.0+ThermoStable V
DNA模板	★★★★★
RNA模板	★★★★★
扩增速度	★★★★★
反应温度	60-68℃
杂质耐受性	★★★★★

以2019-nCov核酸扩增为例三种方法的性能比较

	红黄变色可视化（Cat.No.:A3824-01）	橙绿变色可视化（Cat.No.:A3824-02）	荧光法（Cat.No.:A3824-03）
试剂信息	靶标均为N基因，冻干Assay均相同；搭配不同Buffer实现不同的显色。
检测方法	肉眼观测	肉眼观测	SYBR Green荧光
检测设备	水浴锅、金属浴、PCR仪	水浴锅、金属浴、PCR仪	定量PCR或恒温荧光仪
阳性判读方式	黄色为阳性	绿色为阳性	有扩增曲线为阳性
反应温度	60-65℃
反应时间	30min	20min	15-18min
灵敏度（100%检出）	10 copies/test	10 copies/test	10 copies/test
单copy检出率	10-30%	30-50%	30-50%
假阳性比例	<1%	<1%	<1%
抗杂质能力	+++	+++++	+++++
操作通量	可高通量检测	不适宜大量样本	30-50%

实例展示

1、A3824-01 红黄变色反应（肉眼观察）
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC为ddH₂O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 30min 后。

2、A3824-02 搭配 OG 橙绿变色反应管（A3821）（肉眼观察）
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC为ddH₂O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 20min 后。

3、A3824-03 用于荧光检测（便携式恒温检测仪）
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC为ddH₂O为模板。上图为加样结束反应起始前，下图为 65 度反应 26min 后。

4、A3802 用于HNB变色扩增反应
采用环引物对7个样本（HHV-6 DNA核酸模板进行恒温HNB变色检测反应），NTC为不加模板的对照，产物以HNB显色如下图。

5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix扩增获得三种基因产物（AFSV P72,Covid-19 N Gene-1，Covid-19 N Gene-2），然后以10⁵拷贝的含U产物作为模板，分别用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 进行扩增，反应结束后统计两组之间的Ct，结果为：UDG组在30min内几乎不起峰，无信号；未加UDG组均在4min之前起峰，表明该Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）具有良好的去除残留模板的能力。

关于LAMP核酸扩增的技术专利与商标：LAMP核酸扩增技术专利由日本荣研化学株式会社所拥有（专利号CN1420928A/CN1222614C）。除此外，LAMP商标也隶属日本荣研化学株式会社。恒温扩增原料用酶与预混Mix系列产品，可用于LAMP扩增反应，但并不仅限于LAMP扩增，还可以进行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP（Smart Amplification Process）、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒温扩增方法。

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