上海细胞库
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50管/48样 | ￥ 2800 | 1 |
果胶甲酯化程度(PMD)决定了负电荷数量，这与植物根系细胞壁吸附重金属，抵御重金属毒害密切相关。细胞壁果胶含量和甲酯化程度影响着植物细胞壁对重金属毒害的抵御能力。
果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇在醇氧化酶作用下生成甲醛，接着与 2,4-戊二酮反应显色，该有色物质在 412nm下有特定吸收峰；同时半乳糖醛酸在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应生成紫红色物质，该有色物质在530nm处有特征吸收峰。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值计算得到果胶甲酯化程度（PMD）。
酶标仪、96孔板、水浴锅、可调式移液器、乙醇、浓硫酸、研钵。
| 试剂名称 | 规格 | 数目 | 贮藏 |
| 提取液 | 液体 60mL | x1 | 4℃ |
| 试剂一 | 液体 15mL | x1 | 4℃ |
| 试剂二 | 液体 1mL | x2 | 4℃ |
| 试剂三 | 液体 6mL | x1 | 4℃ |
| 试剂四 | 液体 uL | x1 | -20℃ |
| 试剂五制备液 | 液体 uL | x1 | 4℃ |
| 试剂六 | 液体 15mL | x1 | 4℃ |
| 试剂七 | 液体 1.5mL | x1 | 4℃ |
| 空瓶 | 透明 8mL | x2 | 4℃ |
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 样本 | 200 |
| 试剂一 | 200 |
| 混匀，室温孵育30min，再加试剂二调PH至7-8之间（用PH试纸检测即可），最后再用蒸馏水定容到0.5mL。即得待检液。 | |
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 （只做一管） |
| 待检液 | 100 | - |
| 蒸馏水 | - | 100 |
| 试剂三 | 90 | 90 |
| 试剂四 | 10 | 10 |
| 混匀，30℃孵育20min | ||
| 试剂五 | 200 | 200 |
| 混匀，60℃条件下，孵育15min。（若有明显的浑浊现象可于8000rpm室温离心5min），取出200µL上清液至96孔板中，于412nm处读取吸光值A， △A=A测定-A空白。 | ||
【注】：若△A 小于0.01，可增加待检液加入量V3（如由100µL增至150µL，则试剂三相应减少），或者增加样本取样质量W，则改变后的V3和W需代入公式重新计算。
标准曲线方程：y = 10.726x - 0.0123，x为标准品浓度（µmol），y是△A。
甲醇生成量(µmol/g)=[(ΔA+0.0123)÷10.726÷V3×V2÷V1×V]÷W×D
=1.16×(ΔA +0.0123)÷W×D
W---样本重量，g；
V---样本提取体积，0.5mL；
V1---样本体积，0.2mL；
V2---待检液总体积，0.5mL；
V3---加入待检液体积，0.1mL；
D---稀释倍数，未稀释即为1。
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 （只做一管） |
| 待检液 | 70 | - |
| 蒸馏水 | - | 70 |
| 浓硫酸 | 420 | 420 |
| 可用封口膜缠紧，85℃水浴15min后， 流水冷却至室温。 | ||
| 试剂七 | 14 | 14 |
| 混匀，室温（25℃）暗处反应30min（间隔10min混匀一次），立即取出200µL于96孔中，于530nm处读取吸光值A，△A=A测定-A空白。 | ||
标准曲线方程：y = 2.7424x - 0.0093，x为标准品浓度（mg/mL），y是△A。
半乳糖醛酸含量(µmol/g 重量)
=[(ΔA+0.0093)÷2.7424×V2÷V1×V÷194.5×103]÷W×D
=2.34×(ΔA+0.0093)÷W×D
W：样本重量，g；
V：样本提取体积，0.5mL；
V1：样本体积，0.2mL；
V2：待检液总体积，0.5mL；
Mr：半乳糖醛酸分子量，194.5；
D：稀释倍数，未稀释即为1。
果胶甲酯化程度(%) = 甲醇生成量 ÷ 半乳糖醛酸含量 × 100%
