基本信息

别称:pPICZaA

启动子:AOX1

复制子:pUC

终止子:AOX1 TT

质粒分类:酵母系列，毕赤酵母表达载体

质粒大小:3593bp

质粒标签:C-Myc, C-His

原核抗性:Zeo

筛选标记:Zeo

克隆菌株:DH5a

培养条件:37度

表达宿主:酵母细胞

诱导方式:甲醇诱导

5'测序引物:AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC

3'测序引物:AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

质粒属性

载体宿主：酵母菌

载体用途：蛋白表达

基因种属：空载体

基因类型：ORF

原核抗性：Zeo

真核抗性：Zeo

荧光蛋白：

质粒简介

   pPICZαA，B和C是3.6 kb的毕赤酵母蛋白分泌表达载体。表达的重组蛋白是融合蛋白，含有一个N-端多肽，编码酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）α-因子分泌信号。载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水 平的表达目的蛋白，并且可以用在任何毕赤酵母中，包括X33，GS115菌株，SMD1168H，KM71H。pPICZα  A，B和C系列载体包含以下内容：

①5'端含有AOX1启动子的严格调控，利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因（Ellis等，1985; Koutz等人，1989;tschopp等人，1987A）。

②α-因子分泌信号能够分泌性表达目的蛋白。

③Zeocin抗性基因在大肠杆菌和毕赤酵母都能用于筛选（Baron等人,1992; Drocourt等人，1990）。

④C-端含Myc和His标签，可以用于检测和纯化重组蛋白。

⑤pPICZ A, B, C三种读码框使得可以将基因克隆入载体而不发生任何移码突变。

质粒序列

LOCUS       Exported                3593 bp ds-DNA     circular SYN 10-SEP-2016

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    Untitled 5

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 3593)

  AUTHORS   .

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported Saturday, September 10, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4

            http://www.miaolingbio.com

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..3593

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     promoter        2..940

                     /gene="Pichia pastoris AOX1"

                     /note="AOX1 promoter"

                     /note="inducible promoter, regulated by methanol"

     CDS             941..1207

                     /codon_start=1

                     /gene="MF-alpha-1"

                     /product="N-terminal secretion signal from S. cerevisiae 

                     alpha-factor"

                     /note="alpha-factor secretion signal"

                     /note="Cleavage by the Kex2 protease occurs after the 

                     dibasic KR sequence. The EA dipeptides are then removed by 

                     dipeptidyl aminopeptidase A."

                     /translation="MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLE

                     GDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEA"

     CDS             1275..1304

                     /codon_start=1

                     /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"

                     /note="Myc"

                     /translation="EQKLISEEDL"

     CDS             1320..1337

                     /codon_start=1

                     /product="6xHis affinity tag"

                     /note="6xHis"

                     /translation="HHHHHH"

     terminator      1417..1663

                     /gene="Pichia pastoris AOX1"

                     /note="AOX1 terminator"

                     /note="transcription terminator for AOX1"

     promoter        1678..2089

                     /gene="S. cerevisiae TEF1"

                     /note="TEF1 promoter"

                     /note="promoter for EF-1-alpha"

     promoter        2097..2144

                     /note="EM7 promoter"

                     /note="synthetic bacterial promoter "

     CDS             2163..2537

                     /codon_start=1

                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"

                     /product="antibiotic-binding protein"

                     /note="BleoR"

                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 

                     Zeocin(TM)"

                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD

                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR

                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"

     terminator      2603..2850

                     /gene="S. cerevisiae CYC1"

                     /note="CYC1 terminator"

                     /note="transcription terminator for CYC1"

     rep_origin      complement(2925..3513)

                     /direction=LEFT

                     /note="ori"

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

ORIGIN

        1 agatctaaca tccaaagacg aaaggttgaa tgaaaccttt ttgccatccg acatccacag

       61 gtccattctc acacataagt gccaaacgca acaggagggg atacactagc agcagaccgt

      121 tgcaaacgca ggacctccac tcctcttctc ctcaacaccc acttttgcca tcgaaaaacc

      181 agcccagtta ttgggcttga ttggagctcg ctcattccaa ttccttctat taggctacta

      241 acaccatgac tttattagcc tgtctatcct ggcccccctg gcgaggttca tgtttgttta

      301 tttccgaatg caacaagctc cgcattacac ccgaacatca ctccagatga gggctttctg

      361 agtgtggggt caaatagttt catgttcccc aaatggccca aaactgacag tttaaacgct

      421 gtcttggaac ctaatatgac aaaagcgtga tctcatccaa gatgaactaa gtttggttcg

      481 ttgaaatgct aacggccagt tggtcaaaaa gaaacttcca aaagtcggca taccgtttgt

      541 cttgtttggt attgattgac gaatgctcaa aaataatctc attaatgctt agcgcagtct

      601 ctctatcgct tctgaacccc ggtgcacctg tgccgaaacg caaatgggga aacacccgct

      661 ttttggatga ttatgcattg tctccacatt gtatgcttcc aagattctgg tgggaatact

      721 gctgatagcc taacgttcat gatcaaaatt taactgttct aacccctact tgacagcaat

      781 atataaacag aaggaagctg ccctgtctta aacctttttt tttatcatca ttattagctt

      841 actttcataa ttgcgactgg ttccaattga caagcttttg attttaacga cttttaacga

      901 caacttgaga agatcaaaaa acaactaatt attcgaaacg atgagatttc cttcaatttt

      961 tactgctgtt ttattcgcag catcctccgc attagctgct ccagtcaaca ctacaacaga

     1021 agatgaaacg gcacaaattc cggctgaagc tgtcatcggt tactcagatt tagaagggga

     1081 tttcgatgtt gctgttttgc cattttccaa cagcacaaat aacgggttat tgtttataaa

     1141 tactactatt gccagcattg ctgctaaaga agaaggggta tctctcgaga aaagagaggc

     1201 tgaagctgaa ttcacgtggc ccagccggcc gtctcggatc ggtacctcga gccgcggcgg

     1261 ccgccagctt tctagaacaa aaactcatct cagaagagga tctgaatagc gccgtcgacc

     1321 atcatcatca tcatcattga gtttgtagcc ttagacatga ctgttcctca gttcaagttg

     1381 ggcacttacg agaagaccgg tcttgctaga ttctaatcaa gaggatgtca gaatgccatt

     1441 tgcctgagag atgcaggctt catttttgat acttttttat ttgtaaccta tatagtatag

     1501 gatttttttt gtcattttgt ttcttctcgt acgagcttgc tcctgatcag cctatctcgc

     1561 agctgatgaa tatcttgtgg taggggtttg ggaaaatcat tcgagtttga tgtttttctt

     1621 ggtatttccc actcctcttc agagtacaga agattaagtg agaccttcgt ttgtgcggat

     1681 cccccacaca ccatagcttc aaaatgtttc tactcctttt ttactcttcc agattttctc

     1741 ggactccgcg catcgccgta ccacttcaaa acacccaagc acagcatact aaattttccc

     1801 tctttcttcc tctagggtgt cgttaattac ccgtactaaa ggtttggaaa agaaaaaaga

     1861 gaccgcctcg tttctttttc ttcgtcgaaa aaggcaataa aaatttttat cacgtttctt

     1921 tttcttgaaa tttttttttt tagttttttt ctctttcagt gacctccatt gatatttaag

     1981 ttaataaacg gtcttcaatt tctcaagttt cagtttcatt tttcttgttc tattacaact

     2041 ttttttactt cttgttcatt agaaagaaag catagcaatc taatctaagg ggcggtgttg

     2101 acaattaatc atcggcatag tatatcggca tagtataata cgacaaggtg aggaactaaa

     2161 ccatggccaa gttgaccagt gccgttccgg tgctcaccgc gcgcgacgtc gccggagcgg

     2221 tcgagttctg gaccgaccgg ctcgggttct cccgggactt cgtggaggac gacttcgccg

     2281 gtgtggtccg ggacgacgtg accctgttca tcagcgcggt ccaggaccag gtggtgccgg

     2341 acaacaccct ggcctgggtg tgggtgcgcg gcctggacga gctgtacgcc gagtggtcgg

     2401 aggtcgtgtc cacgaacttc cgggacgcct ccgggccggc catgaccgag atcggcgagc

     2461 agccgtgggg gcgggagttc gccctgcgcg acccggccgg caactgcgtg cacttcgtgg

     2521 ccgaggagca ggactgacac gtccgacggc ggcccacggg tcccaggcct cggagatccg

     2581 tccccctttt cctttgtcga tatcatgtaa ttagttatgt cacgcttaca ttcacgccct

     2641 ccccccacat ccgctctaac cgaaaaggaa ggagttagac aacctgaagt ctaggtccct

     2701 atttattttt ttatagttat gttagtatta agaacgttat ttatatttca aatttttctt

     2761 ttttttctgt acagacgcgt gtacgcatgt aacattatac tgaaaacctt gcttgagaag

     2821 gttttgggac gctcgaaggc tttaatttgc aagctggaga ccaacatgtg agcaaaaggc

     2881 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc

     2941 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga

     3001 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc

     3061 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcaa

     3121 tgctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg

     3181 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc

     3241 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga

     3301 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact

     3361 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt

     3421 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag

     3481 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg

     3541 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag atc

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