上海细胞库
人源细胞系| 稳转细胞系| 基因敲除株| 基因点突变细胞株| 基因过表达细胞株| 重组细胞系| 猪的细胞系| 马细胞系| 兔的细胞系| 犬的细胞系| 山羊的细胞系| 鱼的细胞系| 猴的细胞系| 仓鼠的细胞系| 狗的细胞系| 牛的细胞| 大鼠细胞系| 小鼠细胞系| 其他细胞系|
人源细胞系| 稳转细胞系| 基因敲除株| 基因点突变细胞株| 基因过表达细胞株| 重组细胞系| 猪的细胞系| 马细胞系| 兔的细胞系| 犬的细胞系| 山羊的细胞系| 鱼的细胞系| 猴的细胞系| 仓鼠的细胞系| 狗的细胞系| 牛的细胞| 大鼠细胞系| 小鼠细胞系| 其他细胞系|
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA 微板法)
产品简介：
植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内 IAA 的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化 IAA 使其失去活性，从而调节体内 IAA 的水平，影响植物的生长。
雅吉生物吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA 微板法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与 FeCl3 作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示,通过测定 530nm 处吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平，主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。。
产品组成：
| 名称规格（YS1059） | 100T | 存储 |
| 试剂(A): IAA 标准(200μg/ml) | 5ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(B): IAA Lysis Buffer | 500ml | RT |
| 试剂(C): IAA Assay Buffer | 15ml | 4℃ 避光 |
| 试剂(D): IAA 显色液 | 2ml | RT 避光 |
自备材料：
1、水浴锅、研钵或匀浆器、低温离心机、96 孔板、酶标仪、离心管或试管
2、蒸馏水、浓硫酸
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于 30℃中避光萌发 3~4 天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料；取胚轴称重，按每 100mg 加入 1ml 预冷的 IAA Lysis Buffer 的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨，4℃ 4000g 离心 20min，留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液，短期 4℃保存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-4℃保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用 IAA Lysis Buffer 进行适当匀浆，4℃ 4000g 离心 20min，取上清液，-4℃保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的吲哚乙酸氧化酶，可以使用 IAA Lysis Buffer 工作液进行恰当的稀释。
2、配制 IAA 显色工作液：取适量的 IAA 显色液，按 IAA 显色液：蒸馏水：浓硫酸=1：4：6 的比例混合，即为 IAA 显色工作液，4℃密闭保存，即配即用，不易久置。注意：浓硫酸为强腐蚀性物质，操作须极其小心。
3、稀释 IAA 标准溶液：取适量的 IAA 标准(200μg/ml)，按下表进行稀释：
| 加入物(μl) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| IAA 标准(200μg/ml) | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | 35 | 40 |
| 蒸馏水 | 195 | 190 | 185 | 180 | 175 | 170 | 165 | 160 |
| IAA 浓度(μg/ml) | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 | 35 | 40 |
4、样本处理：按照下表设置对照液、测定液，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
| 加入物(μl) | 对照液 | 测定液 |
| IAA Assay Buffer | 120 | 100 |
| 待测样品 | — | 20 |
| IAA Lysis Buffer | 40 | 40 |
| IAA 标准(200μg/ml) | 40 | 40 |
| 25℃孵育 30min。 | ||
5、 IAA 加样：取 96 孔板，按照下表设置空白孔、标准孔、对照孔、测定孔，先加入 200 μl IAA 显色工作液，再参考下表依次加入 50μl 各种溶液，小心混匀，置于 40℃避光孵育 30min，使反应液呈红色。如果样品中的吲哚乙酸氧化酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μl) | 空白孔 | 标准孔 | 对照孔 | 测定孔 |
| IAA 显色工作液 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 蒸馏水 | 50 | — | — | — |
| 系列 IAA 标准(1~8 号) | — | 50 | — | — |
| 对照液 | — | — | 50 | — |
| 测定液 | — | — | — | 50 |
6、 IAA 测定：以空白孔调零，以酶标仪测定标准孔、对照孔、测定孔 530nm 处吸光度(记为 A 标准、A 对照、A 测定)。
计算：
吲哚乙酸氧化酶活性定义：以 1ml 吲哚乙酸氧化酶提取液在 1h 内氧化的吲哚乙酸量(mg)表示酶活力大小。
以 1~8 号系列 IAA 标准溶液浓度(5、10、15、20、25、30、35、40μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，直接计算直线回归方程。
组织样品的吲哚乙酸氧化酶活性(μg/ml·g·h)={(C1-C2)×V×VT}/(W×t×V1)液体样品的吲哚乙酸氧化酶活性(μg/ml·g·h)={(C1-C2)×V×VT}/(W×t×V1)
式中：
C1=根据标准曲线求得的对照管 IAA 含量(μg/ml)
C2=根据标准曲线求得的测定管 IAA 含量(μg/ml)
VT=酶提取液稀释后总体积(ml)=步骤 1 结束时所得酶粗提液体积(ml)
V1=加样时所用酶的体积(ml)=0.2
V=样本处理时的液体总体积(ml)=5
W=样品鲜重(g)
t=酶反应时间(h)=1
注意事项：
1、 实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20～-80℃。
2、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、 如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定，但应考虑酶标仪的最大检测体积。
4、 IAA 标准(200μg/ml)见光易分解，含有IAA的相关操作均应尽量避光操作。
5、 所测样本的浓度过高，应用IAA Lysis Buffer工作液稀释样品后重新测定。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7、 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
有效期：6 个月有效。低温运输，按要求保存。
