DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
将 DNA 导入细胞的方法很多,采用 DEAE-葡聚糖转染法主要优点是相对简单、快速、同次试验内和不同次实验间的重复性较好,该法尤其适用于瞬时转染。雅吉生物DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶剂溶解,经过滤除菌,临用前 37℃保温并充分混匀。
产品组成: DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)10ml
操作步骤(仅供参考):
1、取对数生长期的细胞,制备成细胞悬液。将细胞密度调整到 5×10 个/ml 接种至 6 孔板。
2、培养12-24h用蒸馏水4或TE 将质粒 DNA 稀释至 0.1~1μg/μl,将 DNA 溶液直接加到转染培养液至其终浓度为 1.0μg/ml。
3、将 DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)预热至 37℃并颠倒混匀,加到 DNA/转染培养液使DEAE-葡聚糖终浓度为 100μg/ml,最适浓度需要自行摸索。
4、将 50~70%汇片的细胞培养物中的培养液轻轻吸出,换上适合体积的 37℃的补充有DEAE-葡聚糖/DNA/转染培养液,37℃孵育 4h。
5、倒置显微镜下观察细胞,细胞内会出现颗粒,有的细胞核出现固缩,有的细胞边缘出现部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖转染常伴有25~75%的细胞死亡。
6、换用 100mmol/L 氯喹培养液继续培养,进行下游实验。
注意事项:
1、 某些特点细胞需要较长的转染时间,因为氯喹有细胞毒性,可在转染的最后时期加入。
2、 转染时,摇动细胞可保障转染效率均一,最适转染时间需通过实验确定。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。