规格	价格	库存
50T	￥ 0.00	200

储存条件

收到SuperReal 荧光定量预混试剂增强版后，请立即置于-20℃避光保存。从-20℃取出使用时，将冻存的2×SuperReal PreMix Plus 和50×ROX Reference Dye融解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再行使用。如解冻后没有使用，须彻底混匀后重新冷冻(在解冻过程中盐会出现分层现象，未混匀进行冷冻，盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用，可在2～8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。

产品简介

本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。产品中预先混有Real Time PCR反应所需合适浓度的SYBR Green I，是一种2×浓度的PreMix，反应液配制十分简单方便。

SuperReal PreMix Plus采用了独特的双组分热启动DNA聚合酶(化学修饰的HotStar Taq

DNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶)，配合精心优化buffer体系，具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点。本升级版试剂在经过成分调整后，扩增特异性上的优势更为突出。

试剂盒特点

1. SuperReal PreMix Plus采用了独特的双组分热启动DNA聚合酶(化学修饰的HotStar Taq DNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶)，从而构成酶活自动调节系统，配合精心优化buffer体系，具有高扩增效率，高扩增特异性和宽广的可信范围的特点。

2. 本产品Buffer体系平衡了K+和NH +的比例，还特别添加了独特的H-Bond因子, 能协同调整反应体系中的氢键作用力，使引物模板退火条件更加严谨，反应的专一性增强，重复性更好。

3. SuperReal PreMix Plus中预混有SYBR Green I，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。

4. 本产品附带ROX Reference Dye，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。

试剂盒原理

本产品采用了独特的双组分热启动DNA聚合酶进行PCR扩增，通过检测反应进程中

SYBR Green I的荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。

本产品中双热启动酶构成了独特的酶活自动调节系统。酶活自动调节系统是由化学修饰的HotStar Taq DNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶组成。其中HotStar Taq DNA 聚合酶占绝大部分比例，其聚合酶活性的激活是严格依赖于95℃高温的一个缓释过程，而Anti Taq DNA聚合酶则在95℃高温下完全激活。经过95℃条件下孵育15 min激活大部分HotStarTaq DNA聚合酶，进入PCR循环后，每经过一轮95℃条件下变性，即可重新激活一部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶独特的酶活缓释机制使其可以与Anti Taq DNA聚合酶构成独特的酶活自动调节系统。PCR反应初期，完全激活的Anti Taq DNA聚合酶可以协同已经激活的HotStar Taq DNA聚合酶达到优化酶活状态，而在整个PCR反应过程中，每一轮新释放的HotStart Taq DNA聚合酶活力刚好可以弥补因热变性所导致的部分酶活损失。因此，SuperReal PreMix Plus在整个PCR反应过程始终保持优化的DNA聚合酶活力，配合精心优化Buffer体系，从而可以获得高扩增效率，高扩增特异性和更加广泛性的模板适应性。

注意事项

1. PCR反应的预变性条件必须设定为95℃ 15 min，用以充分激活热启动酶。

2. 本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

3. 如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬时离心后使用。

4. 引物纯度对反应特异性影响很大，建议使用PAGE级别以上纯化的引物。

5. 引物终浓度为0.3 μM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。如果需要进一步优化，可以在 0.2-0.5 μM范围内调整引物浓度。

μl反应体系中，基因组DNA或cDNA模板的使用量一般小于100 ng，逆转录产物作为模板时，使用量应不超过PCR体系终体积的20%。

进行Real Time PCR反应时，PCR引物的设计非常重要。设计PCR扩增效率高，反应特异性强的引物可以参考以下要求

引物长度	18-30个碱基
GC含量	40-60%
Tm值	引物软件都可以给出Tm，与引物长度，碱基组成，引物使用缓冲的离子强度也有关。上下游引物的Tm值要尽量接近。简单的Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)。一般采用较引物Tm值低5℃作为PCR退火温度。提高退火温度可以增加PCR反应的特异性。
引物及PCR扩增产物序列	PCR扩增产物适宜长度在80-200 bp之间。尽量避开在模板的二级结构区域设计引物。避免上下游引物3′端之间形成2个或以上的互补碱基以减少引物二聚体的形成。引物3'端碱基不能有多于3个连续的G或C。引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构。避免引物3'末端碱基为T。引物序列中A、T、G、C要尽量均匀分布。

常见问题

１．无扩增信号或扩增曲线起峰晚或仅有引物二聚体

原因	解决办法
DNA模板中存在抑制剂	重新纯化模板或降低模板使用量
Mg2＋浓度不合适	使用2×SuperReal PreMix Plus时，PCR反应体系中Mg2＋的终浓度为2 mM。对有些扩增体系，可以将Mg2＋终浓度提高到5 mM。进行Mg2＋终浓度优化时，建议每次增加0.5 mM Mg2＋浓度进行实验。
加样错误或试剂问题	检查试剂浓度和保存条件，包括所使用的引物和模板。重复进行实验。
热启动酶未能激活	使用试剂时，请确保预变性条件为95℃ 15 min，用以有效激活热启动DNA聚合酶。
PCR 条件、引物序列或浓度不当	请确认引物未发生降解，引物浓度及PCR 条件，扩增不好时，通常先尝试降低退火温度，延长退火时间和提高引物浓度，有时也可以提高退火温度，增加延伸时间，降低升温速度。对于GC 含量高的模板，可以适当延长变性时间。如果还是扩增不好，请重新设计引物。
起始模板问题	检查起始模板的浓度，保存条件和质量。重新对模板进行线性梯度稀释，并用新稀释模板进行实验。增加起始模板使用量。