产品及特点

新型布尼亚病毒，  卫生部门从蜱虫中毒者体内分离出的病毒。或将被认定为  一种新型病毒。从目前来看， 这一病毒主要由蜱传播， 且可以治疗， 病死率很低。 目前未发现人传染人的病例。布尼亚病毒自然感染见于许多脊椎动物和节肢动物  (蚊、  蜱、白蛉等)，  可感染小鼠，  并能在一些哺乳类、鸟类和蚊细胞培养中生长;  对人可引起类似流感或登革热的疾病、出血热(立夫特谷热和克里米亚─刚果出血  热等)及脑炎(加利福尼亚脑炎)。有蚊媒、蜱媒、白蛉媒 3 种传播类型。 本产品以  探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测新型布尼亚病毒的试剂盒， 它具有下列特点：

1.   即开即用，  用户只需要提供样品 RNA 模板。

2.   引物和探针经过优化，灵敏性高。

3.   提供阳性对照，  便于区分假阴性样品。

4.   特异性高，  引物是根据新型布尼亚病毒高度保守区设计， 不会跟其他病毒的

RNA 发生交叉反应。

5.   本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6.   本产品只能用于科研。

规格及成分

成分

编号

十孔盒包装

探针法 qRT-PCR 缓冲液

190504a

500 μL（蓝盖）

探针法 qRT-PCR 酶混合液

190504b

100 μL （红盖）

荧光 PCR 专用模板稀释液

180701

1 mL （黄盖）

新型布尼亚病毒探针法 qRT-PCR 引物混合液

15-83700yw

100 μL （白盖）

新型布尼亚病毒 qRT-PCR 探针

15-83700pb

50 μL （棕色管）

新型布尼亚病毒探针法 qRT-PCR

阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

60908-83700pc

50 μL （黄盖）

使用手册

15-83700sc

1 份

运输及保存

低温运输，  -20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂

样品 RNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品 （以 10E2- 10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）  。 由于标准品浓度非常高，  因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行， 千万不能  污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，  本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1.   标记 6 个离心管，分别为 7， 6， 5， 4， 3， 2。

2.   用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，  最好用带芯枪 头，下同） 。

3.   在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.   换枪头， 在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所  得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.   换枪头， 在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所  得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.   重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备

7.   如果有 N 个样品， 最好设置 N+2 个提取， 多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照） ，一个是 NC（样品制备阴性对照） 。可以用 10μL 阳性对照的 10000

倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为

PC 。 另外用水作为 NC。

8.   用自选方法纯化样品的 RNA， 本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂

盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

三、  Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，  在样品制备室进行）

9.   如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管， 其中 N+2 个

用于上步得到的 N+2 个样品， 1 个用于 PCR 阴性对照 （用水做模板），  6 个用于标准曲线。如果做定性分析， 并且只做 1 次重复， 则标记 N+4 个 PCR 管， 其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品， 1 个用于 PCR 阴性对照（用 水做模板） ， 1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板）  。 下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。 样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照， 并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好

后最后加）：

成分

样品管

N+2 个

RT-PCR

阴性对照

管

标准曲线

样品管

（2-7 管）

探针法 qRT-PCR 缓冲液

各 10 μL

10 μL

各 10 μL

探针法 qRT-PCR 酶混合液

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

新型布尼亚病毒 qRT-PCR 探针

各 1 μL

1 μL

各 1 μL