抗体修饰热启动酶 PCR Mix
Abstart PCR Mix
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组成
组分 B110007-0001 B110007-0005
Abstart PCR Mix(2X)
( Mg2+终浓度 2 mM )
1 ml 5 ml
保存方法
-15°C 到 -25°C 保存,有效期见包装。
产品介绍
Abstart PCR Mix 为预先混合的 Abstart Taq DNA 聚合酶、
反应缓冲液、氯化镁和 dNTP 的浓缩溶液。DNA 模版和引
物简单添加即可开始 PCR 反应。常规 PCR 扩增的一致性和
效率得以优化。
操作流程
1. PCR 反应体系的设置:
1) 溶解并混匀 PCR 反应所需的各种溶液。并放置于冰浴
上或冰盒内。建议反应 PCR 液体分装使用,避免反复
冻融。
2) 参考下表设置的反应,建议 PCR 反应体系的配置在冰
浴或在冰盒上进行:
试剂 50 μl 反应体系
Abstart PCR Mix(2X) 25 μl
Template DNA X μl*
Primer F(20 μM) 1 μl
Primer R(20 μM) 1 μl
双蒸水或 Milli-Q 水 Up to 50 μl
总体积 50 μl
*对于不同类型的模板在 50 µl 反应体积中推荐用量如下:
哺乳动物基因组 DNA:0.1-1 µg;
大肠杆菌基因组 DNA:10-100 ng;
质粒 DNA:0.1-10 ng。
过多的模板 DNA 容易导致非特异性的 PCR 产物。
3) 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀,室温离心
数秒,使液体积聚于管底。
4) 各设置好的 PCR 反应管置于 PCR 仪上,开始 PCR 反
应。
2. PCR 反应参数的设置以扩增 1 Kb 目的片段为例:
步骤 温度 时间 循环数
预变性 95°C 3 min -
变性 95°C 30 s
退火 (Tm-5)°C 30 s 35 个循环
延伸 72°C 1 min
最终延伸 72°C 10 min -
保存 4°C forever -
1) PCR 反应的设置需根据模板、引物、PCR 产物的长度
和 GC 含量等条件的不同设定不同的 PCR 反应条件包
括温度、时间和循环数等。
2) 延伸的时间设置需根据 PCR 产物的长度进行设置,通
常每 kb 产物的延伸时间为 1 分钟。例如 PCR 产物的
长度为 1 kb,则延伸时间可以设置为 1 分钟,PCR 产
物的长度为 2 kb,则延伸时间可以设置为 2 分钟,以
此类推。
3) 对于初次进行的 PCR,为尽量确保可以扩增出预期的
PCR 产物,可以把循环数设置为 35。对于需进行半定
量或定量的 PCR 反应循环数一定要进行适当优化,使
PCR 反应达到平台期。
#B110007 保存温度:-20°C
包装规格:1 ml/5 ml
Sangon Biotech