人支原体染料法荧光定量 PCR 试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
50T	￥ 2500	200

人支原体染料法荧光定量 PCR 试剂盒是支原体的一种，它存在于泌尿系和生殖

器中，可以引起泌尿系的感染和生殖器的炎症，对人体健康造成严重损害，因此

快速检测人支原体具有重要意义。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，

本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测人支原体的试剂

盒，它具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2.引物经过优化，灵敏度比常规 PCR 高 100 倍，达到 100 拷贝/反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据人人支原体高度保守区设计。

5.本产品只能用于科研，不能用于临床，足够 50 次 20uL 体系的反应。

成分	编号	十孔盒包装
2×qPCR MagicMix	90408	0.5 mL（棕色）
荧光 PCR 专用模板稀释液	180701	1 mL（黄盖）
人支原体 PCR 引物	14-74110yw	100 μL（白盖）
人支原体阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)	14-74110pc	50 μL（红盖）
DNA 释放剂试用装	130982	50 次（试用装）
使用手册	14-74110sc	1 份

保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂：样品 DNA。

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。

由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能

污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，

本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。

1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，

下同）。

3.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震

荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所

得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所

得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 二、样品 DNA 的制备

7.如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的标准曲线样品的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓度为 1×10E5 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。如果每次制备需要 200μL 样品，则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。

8.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 50 次 DNA 释放剂。

三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

9.如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照管	标准曲线样品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各 10 μL
人支原体 PCR 引物混合液（白盖）	2 μL	2 μL	各 2 μL
自备 10×ROX (见注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
待测样品 DNA 模板	6 μL	不加	不加
第 6 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号）	不加	不加	各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）

仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代