产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 2800 | 200 |
鸭乙型肝炎病毒(DHBV)荧光定量PCR试剂盒(染料法)属于禽嗜肝 DNA 病毒属
（ Avihepadnavirus ） ， 此 属 与 以 HBV 为代表的 正 嗜 肝 DNA 病 毒 属
（Orthohepadnavirus）同属于嗜肝 DNA 病毒科(Hepadnaviridae)。 DHBV 一直 作为研究 HBV、筛选和验证中西药物抗病毒活性的动物病毒模型，通过研究 DHBV 感 染鸭阐明了嗜肝 DNA 病毒的复制过程。在此研究中定量检测 DHBV 具有重要的意义。 本产品就是根据 DHBV 保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。本试剂盒 具有下列特点：
1.根据 DHBV 的保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装（去纸托 |
| 2×qPCR MagicMix | 90408 | 500 μL（装 A 袋） |
| 微量核酸稀释液 （荧光 PCR 专用） | 121206 | 1 mL（装 A 袋） |
| 鸭 HBV PCR 引物混合物 | 14-44200 （原 11-180803a） | 100 μL（装 A 袋） |
| 鸭 HBV 基因阳性对照 (1×10E8 copy/μL) | 14-44200 （原 11-180803pc） | 50 μL（装 B 袋） |
| DNA 病毒裂解液（试用装） | 3674a | 15 次（9 mL） |
| 使用手册 | 11-44200sc | 1 份 |
低温运输、-20℃保存(A 袋试剂放样品准备区、B 袋的阳性对照最好分开放置)，有效期
一年。
DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）
二、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常
| 分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 5.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 6.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 7.换枪头，在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行） | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 9.在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存好后最后加）：
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| （30 个循环） | 60℃ | 15 秒 |
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| 72℃ | 15 秒 |
| 11. 数据采集 |
| 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时， |
| 最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光 |
| 谱在 530 nm。 |
| 四、数据处理 |
| 12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品 |
| 的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。 |
