产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 2800 | 200 |
| 杏仁源性成分染料法荧光定量 PCR 试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有杏仁的成分。现代食品加工工艺极大 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 这一需求根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点： | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 2. 根据杏仁保守区域设计引物，能专一性地检测出样品中的杏仁成分，但不能检测其 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 他非杏仁成分。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 3. 荧光定量 PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 4. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 5. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 6. 提供阳性标准品，便于分析实验结果。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 7. 对混合样品中杏仁成分的检测下限为 0.01%，对样品中杏仁成分的核酸检测下限 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 为 0.1ng/µL。 | ||||||||||||||||||||||||||||||
| 8. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的荧光定量 PCR。
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低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较
高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作
| 一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标 |
| 准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本 |
| 试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样 |
品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对 照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放 剂试用装。则按下面步骤操作：
9.配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料 管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合 均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一 次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待 测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
10. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小）或 5uL 液 体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对 照中加入 5uL 水。
11. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样 品则震荡混匀。
12. 95℃保温 10 分钟。
13. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA
释放液足够进行 50-100 次 PCR。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
14. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品（也充当 PCR 阳性对照）。 如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix （棕色管） | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 杏仁源性成分 PCR 引物 混合液（白盖） | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 DNA 模板 | 各 6 μL | 不加 | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样 品稀释液（2-7 号） |
不加 |
不加 | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
| 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene | ||||||||||||||||||||
| 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。 | ||||||||||||||||||||
| 16. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 qPCR（具体 PCR 参数可以根据 qPCR 仪器的 | ||||||||||||||||||||
| 不同而自行优化）。
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