产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 2500 | 200 |
1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。
2. 根据猪线粒体 Cytb（细胞色素 b）基因保守区域设计引物，能专一性地检测出猪的成分，但不能检测其他非猪类动物成分（如鸡、牛、羊等）。
3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中猪成分的检测下限为 0.1%， 对样品中猪成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。
本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装（去纸托） |
| 2×PCR MagicMix | 90805 | 1mL（亮黄盖） |
| 猪源性成分 PCR 引物混合液 | 13-139yw | 100 uL（白盖） |
| 猪源性成分 PCR 阳性对照 | 13-139pc | 50 uL（黄盖） |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL（本色盖） |
| 天净沙 DNA 释放剂试用装 | 130982 | 50 次（成分见下） |
| 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 130982a | 50 uL（白盖） |
| 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 130982 | 100uL（绿盖） |
| 免 DNA 提取试剂溶液 B | 130982c | 400 uL（红盖） |
| 使用手册 | 13-139sc | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较
高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的天净沙 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或
5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA
释放液足够进行 50-100 次 PCR。二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
| 成 份 | 样品 （用量 1） | 样品 （用量 2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| 猪源性 PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
3. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用天净沙 DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果最好的那个模板用量）：
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10 分钟 |
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PCR 反应 （30 个循环） | 94℃ | 45 s |
| 56℃ | 45 s | |
| 72℃ | 45 s | |
| 延伸 | 72℃ | 5 分 |
5. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需
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| 要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，需要用通用引物（如真核生物专一 PCR 引物，需自备）测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求，如果通用引物也扩不出来，需要浓缩并再次纯化 DNA 样品，或者更换 DNA 提取方法，直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。 |
