产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 2800 | 200 |
1.根据腺病毒 Hexon 基因，设计的针对腺病毒的 PCR 引物，克服了其他病毒 的干扰。
2.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
3.荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
4.本试剂盒足够 100 次 20uL 体系的 qPCR 反应。
5.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装(去纸托 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL（A 袋包装） |
| Hexon 基因专一性引物 A | yw1462 | 1 OD（A 袋包装） |
| Hexon 基因专一性引物 B | yw1463 | 1 OD（A 袋包装） |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL×2（A 袋包装 |
| Hexon 基因阳性对照 (10E9 copy/μL) | yw14641465 | 50 μL（B 袋包装） |
| 使用手册 | 14-35700sc | 1 份 |
低温运输、-20℃保存(B 袋的阳性对照一定要放扩增区，A 袋的其余试剂放样品
准备区)，有效期一年
一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化腺病毒样品的 DNA，也可以另购本公司的柱式病毒 DNAout 或一管式病毒 DNAout，此产品跟本试剂盒兼容。
二、引物的制备（在样品制备室进行）
2.按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物 试管上的标签），使得两条引物的浓度均为 10 uM（10 pmol/uL）。 三、稀释阳性对照（以 10E3-10E8 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度 非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试 剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活
体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长度为 139bp 的 DNA 片段作为阳性
对照。
3.标记 5 个离心管，分别为 8，7，6，5，4，3 号。
4.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
5.在 8 号管中加入 5 μL 10E9 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(试剂 盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 10E8 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.在 7 号管中加入 5 μL 10E8 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(上步 稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的腺病毒 Hexon 基因阳性对照(上步 稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
8.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
9.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
10. 换枪头，从 4 号管中取 5 μL 溶液到 3 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E3 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
三、设置 PCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
11. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样 品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有成 分盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品 | 阴性对照 | 阳性对照（3-8 管） |
| 2×qPCR Mix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| Hexon 基因专一性引物 A，10 uM | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| Hexon 基因专一性引物 B，10 uM | 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 DNA 模板 | 1-5 μL | 不加 | 不加 |
|
阳性对照（3-8 号） |
不加 |
不加 | 各 5μL（3 号样到 3 号管，4 号样到 4 号管…） |
| 补水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同
而自行优化）。
13. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，
最大发射光谱在 530 nm。
| 四、数据处理 |
| 14. 以 Hexon 基因序列阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标 |
| 准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 |
| Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。 |
