细小病毒 B19 染料法荧光定量 PCR 试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

规格	价格	库存
50T	￥ 2800	200

细小病毒 B19 染料法荧光定量 PCR 试剂盒(Parvovirus B19)引起的典型疾病是传染性红斑和急性关节病，在妊娠妇女可引起胎儿水肿乃至死胎。荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测人细小病毒 B19 的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过优化，灵敏性高。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据人细小病毒 B19 高度保守的 VP1 区设计。

PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

成分	编号	十孔盒包装
2×qPCR MagicMix	90408	0.5 mL（棕色）
荧光PCR 专用模板稀释液	180701	1 mL（黄盖）
细小病毒 B19 PCR 引物混合液	14-30900yw	100 μL（白盖）
细小病毒 B19 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)	14-30900pc	50 μL（红盖）
DNA 病毒裂解液试用装	3674a	15 次（9 mL）
使用手册	14-30900sc	1 份

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能

污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。1.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所

得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备

7. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性

对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的标准曲线样品的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓度为 1×10E5 拷贝/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要 200μL 样品，则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。

8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次一管式病毒 DNAout。

三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的N+2 个样品，1 个用于PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照管	标准曲线样品管（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （棕色管）	10 μL	10 μL	各 10 μL
细小病毒 B19 PCR 引物混合液（白盖）	2 μL	2 μL	各 2 μL
自备 10×ROX (见注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
待测样品 DNA 模板	6 μL	不加	不加
第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号）	不加	不加	各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…）

注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光PCR 仪器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，则用水替代。