产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 3500 | 200 |
| 人单纯疱疹病毒 I 型荧光定量 PCR 检测试剂盒(染料法)（Herpes Simple Viruses， HSV）属于疱疹病毒科 a 病毒亚科， | ||||||||||||||||||||||||
| 为双股 DNA 病毒，疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。对人 | ||||||||||||||||||||||||
| 的感染通过人与人接触传染。根据抗原性的差别目前把 HSV 分为 1 型和 2 型。1 型主 | ||||||||||||||||||||||||
| 要由口唇病灶获得，2 型可从生殖器病灶分离到。从发生后四个月到数年被感染的人数 | ||||||||||||||||||||||||
| 可达人口总数的 50-90%，是最易感染人的一种病毒。因此对 HSV-1 的快速诊断具有 | ||||||||||||||||||||||||
| 重要的意义。本产品就是根据 HSV-1 保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR | ||||||||||||||||||||||||
| 产品。本试剂盒具有下列特点： | ||||||||||||||||||||||||
| 1.根据 HSV-1 的 gD 基因设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。 | ||||||||||||||||||||||||
| 2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。 | ||||||||||||||||||||||||
| 3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。 | ||||||||||||||||||||||||
| 4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。 | ||||||||||||||||||||||||
| 5.本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。 | ||||||||||||||||||||||||
| 6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
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低温运输、-20℃保存(A 袋和 B 袋的试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照最好分开放置)，
DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本 试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）
按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上
的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足够 100 次 qPCR 反应。
三、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，
因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供可以直接使用的长为 52bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
3.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
4.用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
5.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得
1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头，从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
8.换枪头，从 5 号管中取 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得
1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
9.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
10. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后最后加）：
| 成分 | 样品 | 阴性对照 | 阳性对照（2-7 管） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| 待测样品 DNA 模板 | 1-5 μL | 不加 | 不加 |
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阳性对照（2-7 号） |
不加 |
不加 | 各 5μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
| 补水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照，其他荧光 PCR 仪
| 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene | |||||||||||||
| 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。 | |||||||||||||
| 11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 | |||||||||||||
| 优化）。
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