产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50T | ￥ 3800 | 200 |
水泡性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）能感染多种动物和昆虫。家畜中自然感染VSV 的有马、牛、羊、猪。血清学试验证明野生动物（野猪、浣熊和鹿等）可以自然感染。在巴拿马的树栖和半树栖动物血液中发现了IND-1 型的抗体。在蝙蝠、食肉动物和一些啮齿动物的血清中发现了抗 NJ 型的抗体。人感染主要见于实验工作人员和流行地区与家畜接触的人。为此本公司开发了简单快捷的水泡性口炎病毒 RT-LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 RNA。
2. 用 RT-LAMP 恒温扩增法扩增水泡性口炎病毒特异片段，不需要荧光 PCR等贵重仪器。同时扩增时间只需要 1h，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。
4. 特异性高，由于使用四条针对水泡性口炎病毒保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的 PCR 专一性更高。
5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，最低灵敏度：10 拷贝/μL。
本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研
| 成份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×可视化 UNG-LAMP MagicMix | 180703a | 500μL（绿盖） |
| 水泡性口炎病毒 RT-LAMP 引物混 合液 | 16-34400yw | 100μL（白盖） |
| 水泡性口炎病毒 RT-LAMP 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 60908-34400pc | 50μL（黄盖） |
| 天净沙核酸释放剂（试用装） | 61202 | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 16-34400sc | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。水泡性口炎病毒 RT-LAMP 阳性对
照最好单独放置，不要污染其他试剂。
、样品 RNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒 RNAout 或其升级版柱式病毒RNAout。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μL 水泡性口炎病毒RT-LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个样品一起进行RNA 提取操作，得到 N+2 个 RNA 样品。
二、RT-LAMP（20μL 体系）
3.
反应设置：如果有 N+2 个 RNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 RT-LAMP扩增，增加 RT-LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分：
1. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
置于 25℃ 5 min（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增 60-120 min（如果不使用 Loop 引物，则最好保温 2h）。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50μL 石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）
1. 80℃10min 灭活 Bst 聚合酶和 UNG 酶。
2. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同
1. 的两个样品）：
如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL RT-LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 Loading Buffer），最好使用 100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到梯形扩增产物。典型的电泳结果见下图（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）
注意消除环境污染，RT-LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix被污染
