产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50次 | ￥ 3500 | 200 |
非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死率几乎高达 100%，ASF 最近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA。
2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。
3. 检测灵敏性比PCR 高 10 倍以上。
4. 特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引物的PCR 专一性更高。
5. 每个反应的线性范围：10E2-10E7拷贝/μL ,
6. 最低灵敏度：10 拷贝/μL 。
7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。
| 成份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| 2×可视化UNG-LAMP MagicMix | 180703a | 500μL（绿盖） |
| 非洲猪瘟病毒 LAMP 引物混合液 | 16-23000yw | 200μL（白盖） |
| 非洲猪瘟病毒 LAMP 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 60908-23000pc | 50μL（黄盖） |
| 使用手册 | 16-23000sc | 1 份 |
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。非洲猪瘟病毒阳性对照 2.0 最好单
独放置，不要污染其他试剂。
待测样品
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化病毒样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μL MRSA LAMP阳性对照的10000倍稀释液作为样品制备阳性对照。样品制备阴性对照是直接用 X mL 水作为 阴性对照，然后和 N 个样品一起进行细菌 DNA 提取操作。得到N+2个DNA样品。
二、LAMP（20μL 体系）
反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则最好设置 N+4 个 LAMP 扩增，增加一个 LAMP 阴性对照和 LAMP 阳性对照。在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | 阴性对 照管 | 阳性对 照管 |
| 2× 可视化 UNG-LAMP MagicMix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 非洲猪瘟病毒LAMP 引物 混合液 | 各 4μL | 4 μL | 4 μL |
| N+2 样品 DNA 模板 | 各 6 μL | - | - |
| LAMP 阴性对照（水） | - | 6 μL | - |
| LAMP 阳性对照（用非洲猪瘟病毒LAMP 阳性对照的 100 倍稀释液） | - | - | 6 μL |
2. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后比对。
3. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放63℃扩增60-120分钟（如果不使用Loop引物，则最好保温2小时）。如果是在PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。
4. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。
5. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照相留底。
实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴
性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）：
9. 如果需要也可以电泳确认实验结果：取 10μL LAMP 扩增产物直接进行 2%琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加 loading buffer），最好使用 100 bp DNA Marker。如果样品为阳性，将会得到长度为 200bp 的梯形扩增产物。典型的电泳结果见下表（奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果。此处的 9 号和 10 号跟上步照片中的 9 号和 10 号是相同的两个样品）
10. 注意消除环境污染，LAMP 产物易产生气溶胶，飘在空气中影响下一次实验，建议反应结束后，用紫外灭菌。先加好除阳性对照和样品以外的其它溶液，到另一个房间添加阳性对照及样品，可有效防止引物、MagicMix
被污染。
