上海细胞库
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<编号：YS10075S 可见分光光度法 50管/24样>
注 意：正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
测定原理：
在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：60% 乙醇（自备）
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。
总酚提取：
将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h。10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2mL，待测。
测定操作表：
|
| 对照管 | 测定管 |
| 样本待测液（µL） | 50 | 50 |
| 试剂一（µL） |
| 250 |
| 混匀，25℃静置2min | ||
| 试剂二（µL） | 250 | 250 |
| H2O（µL） | 700 | 450 |
| 混匀，25℃静置 10 min，蒸馏水调零，1mL 比色皿分别测定 760nm 下测定管和对照管吸光值，ΔA=A 测定-A 对照，每个测定管设一个对照管。 | ||
总酚含量计算公式：
标准曲线：y = 5.615x+0.0012，R2 = 0.9994
总酚含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0012）÷5.615×V 样÷(V 样÷V 样总×W)
= 0.356×（ΔA– 0.0012 ）÷W
V样总：加入提取液体积，2mL； V样：反应中样品体积，0.05mL； W：样品质量，g
注意事项：
1. 吸光值大于2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。
3. 最低检出限为2.4 μg/g
