类胡萝卜素（Carotenoid）检测试剂盒（比色法）

一、产品简介：

叶绿体是光合作用的细胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作，叶绿体中所含的色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素 b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll);类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物，

给植物和动物提供天然色素，是重要的抗氧化剂，并有能力转换为必需维生素，类胡萝卜素可预防细胞、组织和基因损毁，增强身体免疫系统，抵御感染，减少癌症风险，保护心脏。

雅吉生物类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)检测原理是类胡萝卜素不溶解

于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类胡萝卜素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的

吸光度(4)与其中溶质浓度(9)和液层厚度(L)成正比，即 A=αCL，其中a为比例常数，当溶

液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为 1cm 时，α为该物质的吸光系数，在该试剂盒情

况下叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素分别在 665nm、649nm、470nm 处有最大吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素 a、叶绿素 b、总叶绿素、类胡萝卜素含量，主要用于植物组

织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以分光光度计定量检测叶绿素 a、叶绿素 b、总叶绿素

类胡萝卜素含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

二、产品组成：

三、自备材料：

研钵或匀浆器、离心管、滤纸或纱布、离心机、比色杯、分光光度计

四、操作步骤(仅供参考)：

1、类胡萝卜素提取:

①取菠菜或其他植物新鲜叶片，洗净，擦干，去中脉，称取剪碎的新鲜样品 0.1g，置于

研钵或匀浆器，加入少量提取粉剂(约 50mg)和 1ml Carotenoid Assay Buffer，研磨或

匀浆成液态。

②)将研磨液或匀浆液转移至 10ml离心管，用少量 Carotenoid Assay Buffer 冲洗研钵或匀浆器数次，最后连残渣一同倒入 10ml 离心管，补加 Carotenoid Assay Buffer 至

10ml，混匀，避光放置5min-2h。

2、滤纸或三层纱布过滤，留取滤液，也可采用离心，取上清液待测。

3、 Carotenoid 测定:

①新鲜植物叶片或其他绿色植物组织(含叶绿体)类胡萝卜素含量测定:

分光光度计开机预热 30min 以上，调节多波长至 665nm、649nm和 470nm;取类胡

萝卜素提取液加入光径为 1cm 比色皿中，以 Carotenoid Assay Buffer 调零，分别用分

光光度计测定提取液在 665nm、649nm、470nm 处的吸光度(A₆₆₅、4₆₄₉、A₄₇₀)。

②黄色或其他非绿色植物组织(不含叶绿体)类胡萝卜素含量测定:

分光光度计开机预热 30min 以上，调节波长至 440nm;取类胡萝卜素提取液加入光径

为 1cm 比色皿中，以 Carotenoid Assay Buffer 调零，用分光光度计测定提取液在

440nm 处吸光度(A₄₄₀)。

计算：

1、新鲜植物叶片或其他绿色植物组织(含叶绿体)类胡萝卜素含量计算:

叶绿素a含量(mg/g)=C_axVxN/(Wx1000)

叶绿素b 含量(mg/g)=C_ьxVxN/(Wx1000)

总叶绿素含量(mg/g)=C_TxVxN/(Wx1000)

类胡萝卜素含量(mg/g)=C_cxVxN/(Wx1000)

式中:

C=13.95xA₆₆₅-6.88xA₆₄₉ (mg/L)

C6=24.96xA₆₄₉-7.32xA₆₆₅ (mg/L)

C=6.63xA₆₆₅+18.08xA₆₄₉ (mg/L)

Cc=(1000xA₄₇₀-2.05xC_a-114.8xC_b)/245(mg/L)

=(1000xA₄₇₀-2851.304xA₆₄₉ +811.7385xA₆₆₅)/245(mg/L)

V=类胡萝卜素提取液体积(ml)=10(ml)

N=稀释倍数

W=样品鲜重或干重(g)

1000=ml与L的单位换算

2、黄色或其他非绿色植物组织(不含叶绿体)类胡萝卜素含量计算:

类胡萝卜素含量(mg/g)= A₄₄₀/(250x1)xVxNx1000/W=0.04xA₄₄₀xN/W

式中:

V=类胡萝卜素提取液体积=0.01(L)

N=稀释倍数

W=样品鲜重或干重(g)

250=类胡萝卜素经验消光系数(L/g/cm)

1000=g与 mg 的单位换算

1=比色皿的光径(cm)

注意事项：

1、 为避免叶绿素和类胡萝卜见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。

2、 若不确定组织中有无叶绿素影响，可取提取液用分光光度计在波长 600-700nnm 下进行波长扫描，若有波峰，则证明样品中有叶绿素，反之则无。

3、 当样品吸光值大于1时，可适当稀释后再进行测定，计算时乘以稀释倍数。

4、 若采用聚苯乙烯材质的 96 孔板测定，则应在加样 5min 内测定完毕。

5、 Carotenoid Assay Buffer 易挥发，不用时需拧紧瓶盖.

6、 色素提取液不能出现浑浊现象，否则应重新过滤。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

有效期：12个月有效。