规格 | 价格 | 库存 |
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50管/48样 | ¥ 600 | 10 |
100管/96样 | ¥ 1000 | 10 |
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
测定原理:
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:氯仿,自备。
超氧阴离子提取:
1. 植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
3. 血清或培养液:直接测定。
测定操作表:
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) |
| 500 |
提取液(μL) | 500 |
|
试剂一(μL) | 400 | 400 |
混匀,37℃水浴20min | ||
试剂二(μL) | 300 | 300 |
试剂三(μL) | 300 | 300 |
混匀,37℃水浴20min | ||
试剂四(μL) | 500 | 500 |
混匀,8000g,25℃,离心5min,小心吸取上层水相1mL, 1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定A530。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。 |