注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
土壤淀粉酶测试盒测定意义
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,
是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。
测定原理
淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与 3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在 508nm 处有
特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
需自备的仪器和用品
天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂的组成和配制
试剂一:液体 1mL×1 支,4℃保存。
试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
测定操作表
对照管 测定管
土样(g) 0.02 0.02
试剂一(μL) 10 10
25℃静置 15min
试剂二(μL) 110 50
试剂三(μL) 60
充分混匀,37℃震荡 1h,8000rpm,25℃,离心 10min
上清液(μL) 100 100
试剂四(μL) 100 100
充分混匀,90℃水浴 5min,待冷却后,于微量石英比色皿/96 孔板中测定
508nm 吸光值,分别记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 对照管。
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每 g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d /g)=(△ A +0.034)÷0.2525×V 反总÷W÷T
= 10.464×(△ A +0.034)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1h;W:样本质量,g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每 g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。
S-AL(mg/d/g)=(△ A +0.034)÷0.1263×V 反总÷W÷T
=20.928×(△ A +0.034)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1d; W:样本质量,g