上海细胞库
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| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50管/24样 | ￥ 700 | 200 |
| 100管/48样 | ￥ 1280 | 200 |
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
土壤亚硝酸还原酶试剂盒可见分光光度法测定意义
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶之一，参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少，即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿。
试剂的组成和配制
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 10mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前50℃加热溶解）
试剂五：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
测定操作表
土样自然风干或35℃烘干
|
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 风干土样（g） |
| 0.1 | 0.1 |
| 蒸馏水（μL） |
| 200 |
|
| 试剂一（μL） | 200 |
| 200 |
| 试剂二（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 混匀后，25℃反应 1h | |||
| 试剂三（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 充分震荡 30S，10000rpm，4℃，离心 10min | |||
| 上清液（μL） | 500 | 500 | 500 |
| 工作液（μL） | 1000 | 1000 | 1000 |
| 充分混匀，室温静置显色10min，用蒸馏水调零，于1mL玻璃比色皿中测定540nm各管吸光值，分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。 | |||
计算公式
标准曲线：y =0.0129x - 0.0106，R2 =0.9985
酶活单位定义：每g土样每24h还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR（μmol/d/g）=[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷0.0129×V 反总÷W÷T
=930.23×[A 空白管-(A 测定管-A 对照管)+0.0106]÷W
V 反总：反应体系总体积，0.5mL；T：反应时间，1h=1/24d；W：样本质量，g。
注意事项
1、 配制好的试剂二和工作液3天内使用完。
2、 若吸光值超过2，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3、 严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
