产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 50管/48样 | ￥ 880 | 200 |
| 100管/96样 | ￥ 1500 | 200 |
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
木质素过氧化物酶（Linin peroxidase ，Lip）试剂盒测定意义
木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在 310nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）。
试剂组成和配制
试剂一：液体 115mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 2mL×1 支，4℃保存。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
测定操作
|
| 测定管 |
| 试剂一（μL） | 120 |
| 试剂二（μL） | 40 |
| 样品（μL） | 20 |
| 试剂三（μL） | 20 |
| 充分混匀，于微量石英比色皿/96 孔板，蒸馏水调零，测定 310nm 处 10s和 310s 吸光值，记为 A1 和 A2，△A=A2- A1 | |
酶活计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min/mg prot）=△A÷（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 215×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
LiP 活性（nmol/min/g）=△A÷（ε×d）×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 215×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 215×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
LiP 活性（nmol/min/L）=△A÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 2.15×105×△A
ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；
V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
LiP 活性（U/mg prot）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 430×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
LiP 活性（U/g）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 430×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
LiP 活性（U/104cell）=△A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 430×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位（U）。
LiP 活性（U/L）=△A÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T= 4.3×105×△A
ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，
1mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓
度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min
