规格 | 价格 | 库存 |
---|---|---|
50管/24样 | ¥ 880 | 200 |
100管/48样 | ¥ 1500 | 200 |
测定意义:
土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC) 试剂盒S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者400n有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入13mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存;
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、 加样表
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μL) | 10 | 10 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
试剂二(μL) | 130 |
|
试剂三(μL) | 160 | 160 |
混匀, 37℃水浴1h后,立即沸水浴煮沸5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却
试剂二(μL) |
| 130 |
充分混匀,10000g常温离心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)
上清液(μL) | 70 | 70 |
试剂四(μL) | 130 | 130 |
充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC活力(U/g 土样)= (ΔA+0.0027)÷0.0032×V反总÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y=0.0016x-0.0027;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC活力(U /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反总÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。