规格 | 价格 | 库存 |
---|---|---|
50管/24样 | ¥ 880 | 200 |
100管/48样 | ¥ 1500 | 200 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)试剂盒测定意义
S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究 S-NR 的活性对合理施肥,降低氮素的损失具有重要意义。
测定原理
S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ+NADH+H+→ NO2ˉ+NAD++H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及α- 萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰,可用分光光度法测定。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一:液体 12mL×1 瓶,-20℃保存。
试剂二:液体 4mL×1 瓶,-20℃保存。
试剂三:液体 9mL×1 瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60度水浴溶解后使用)。
试剂四:液体 9mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:标准品储备液 1mL,-20℃保存。
0.1μmol/mL 标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取0.1ml加蒸馏水定容至 10ml。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
1mL 带盖离心管 | 试剂名称 | |||
测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 | |
风干土样(g) | 0.06 | 0.06 |
|
|
0.1μmol/mL标准液(μL) |
|
| 60 |
|
蒸馏水(μL) |
| 300 |
| 360 |
试剂一(μL) | 225 |
| 225 |
|
试剂二(μL) | 75 |
| 75 |
|
混匀后,盖盖后 37℃水浴 60min,8000g 25℃离心 10min,取上清液 | ||||
上清液(μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂三(μL) | 85 | 85 | 85 | 85 |
试剂四(μL) | 85 | 85 | 85 | 85 |
混匀,显色 20min 后,4000g,25℃离心 10min,取 200uL 上清液至微量石英比色皿或 96
孔板中,540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。S-NR 活性计算:
单位的定义:每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个S-NR活力单位。
S-NR(μmol /d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总÷W÷T =12×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准管:标准管浓度,0.1μmol/mL;V 反总:反应体系总体积,0.3mL;T:反应时间,1h=1/24d; W:样本质量,0.06g。