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土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)试剂盒
产品名称:
土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)试剂盒
英文名称:
Solid-Nitrate Reductase
产品编号:
YS938
产品类别:
分光法检测盒
检测样本:
YS938
[价格]
规格 价格 库存
50管/24样 ¥ 880 200
100管/48样 ¥ 1500 200

产品详情

 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)试剂盒测定意义

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究 S-NR 的活性对合理施肥,降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ+NADH+H→ NO2ˉ+NAD+H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及α- 萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰,可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一:液体 12mL×1 瓶,-20℃保存。

试剂二:液体 4mL×1 瓶,-20℃保存。

试剂三:液体 9mL×1 瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60度水浴溶解后使用)。

试剂四:液体 9mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:标准品储备液 1mL,-20℃保存。

0.1μmol/mL 标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取0.1ml加蒸馏水定容至 10ml。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

1mL 带盖离心管

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g)

0.06

0.06

 

 

0.1μmol/mL标准液(μL)

 

 

60

 

蒸馏水(μL)

 

300

 

360

试剂一(μL)

225

 

225

 

试剂二(μL)

75

 

75

 

混匀后,盖盖后 37℃水浴 60min,8000g 25℃离心 10min,取上清液

上清液(μL)

130

130

130

130

试剂三(μL)

85

85

85

85

试剂四(μL)

85

85

85

85

混匀,显色 20min 后,4000g,25℃离心 10min,取 200uL 上清液至微量石英比色皿或 96

孔板中,540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。S-NR 活性计算:

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个S-NR活力单位。

S-NR(μmol /d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总÷W÷T =12×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)

C 标准管:标准管浓度,0.1μmol/mL;V 反总:反应体系总体积,0.3mL;T:反应时间,1h=1/24d; W:样本质量,0.06g。

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