规格 | 价格 | 库存 |
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50管/48样 | ¥ 55 | 200 |
100管/96样 | ¥ 880 | 200 |
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
土壤中性磷酸酶 (soil neutral phosphatase,S-NP)活性测定试剂盒测定意义:
土壤磷酸酶是催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。磷酸酶活性受到土壤碳、氮
含量、有效磷含量和pH的显著影响,根据最适PH范围,一般把土壤磷酸酶分为中性、酸性和碱性三种类型。
测定原理:
中性环境中,S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出 NP 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰、蒸馏水、 乙醇和甲苯。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃ 避光保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃ 避光保存。临用前加1152μL无水乙醇(自备),48μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用)
标准品:液体×1 瓶,0.5 μmol/mL 酚标准液,4℃保存。
催化反应:
称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇15min;加400μL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。
显色反应:
1. 分光光度计预热30min,调节波长到660nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL 蒸馏水,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后25℃静置30 min,于660nm 测定吸光度,记为A空白管。
3. 标准管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL标准液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后25℃静置 30min,于 60nm测定吸光度,记为A标准管。
4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL上清液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后25℃静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
S-NP 活性计算:
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-NP(nmol/d/g)= [C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V 总÷W÷T
= 725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:0.5μmol/mL;V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24h=1d。