产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
| 规格 | 价格 | 库存 |
|---|---|---|
| 12次 | ￥ 300 | 200 |
| 50次 | ￥ 800 | 200 |
| 200次 | ￥ 3000 | 200 |
病毒RNA抽提试剂盒(离心柱式)
产品简介：
离心柱式病毒RNA抽提试剂盒( Viral RNA Isolation Kit with Spin Column)是一种基于离心柱 法从含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提长度 大于200个核苷酸(nucleotide, nt)的病毒RNA的试剂盒。抽提获得的大于200个核苷酸的病毒RNA样品(可能同时含有样品中的其 它RNA)可以用于各种常规用途。
本试剂盒抽提得到的病毒RNA可用于qRT-PCR、反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外 翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
本试剂盒抽提病毒RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后让RNA特异性地结合到纯化柱上， 而蛋白质等其它组分通过高速离心被有效去除，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度 的RNA洗脱下来。
本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行病毒RNA分离纯化， 能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿 等有毒有害有机试剂。
本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化，无需繁琐的病毒RNA沉淀步骤，抽提操作过程仅15-20分钟。相比于传统的Trizol 抽提法，本试剂盒的操作流程显著简化， 缩短了抽提时间， 降低了病毒RNA被降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比，所需操 作步骤和操作时间基本一致。
本试剂盒适用于含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中病毒RNA的抽提，为提高病毒RNA的提取 量，建议自备carrier RNA。Carrier RNA一方面可以提高微量病毒RNA在纯化过程中与纯化柱的结合效率和洗脱效率；另一方面 可以降低被可能存在的痕量残留RNase降解的风险。Carrier RNA在病毒含量较少的情况下效果更为明显。Carrier RNA推荐购 买我司的R0036 Carrier RNA (病毒RNA等抽提用)
本试剂盒小包装R0035S可用于12个样品的RNA抽提，中包装YS0035S可用于50个样品的RNA抽提，大包装R0035L可用于200个 样品的RNA抽提。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| YS0035S-1 | 裂解液 | 32ml |
| YS0035S-2 | 结合液 | 32ml |
| YS0035S-3 | 洗涤液I | 32ml |
| YS0035S-4 | 洗涤液II | 63ml |
| YS0035S-5 | 洗脱液 | 5ml |
| YS0035S-6 | RNA纯化柱及废液收集管 | 50套 |
| YS0035S-7 | RNA洗脱管 | 50个 |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：室温保存， 一年有效
注意事项：
如果样品中含有细胞或组织，不影响病毒RNA的抽提，但须注意抽提获得的病毒RNA中包含细胞或组织的RNA。
为提高病毒RNA的提取量，推荐使用我司的Carrier RNA (病毒RNA等抽提用) (R0036)或自备carrier RNA。
本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。 如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂 盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用我司生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的 RNase。
使用冻存的样品抽提RNA的效果通常比新鲜的样品差一些。因为在样品冻融过程中一些RNase会被释放出来并消化样品中的 RNA，建议尽量避免冻融。对于病毒样品， 推荐使用我司生产的RNALater™病毒RNA稳定保存液(R0141)进行保存以保证样品 RNA的完整性。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。
结合液、洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明：
1. 样品的准备。
a. 液体样品的准备。
含病毒的血浆、血清、无细胞体液、拭子、细胞培养上清等样品，按照常规方法取样。每100µl液体样品加入300µl裂解液。轻 轻颠倒混匀3-5次。
选做：为提高病毒RNA的提取量，建议在不含或含很少细胞或者组织的样品中加入carrier RNA。推荐使用我司的R0036 Carrier RNA (病毒RNA等抽提用)，或使用下面方法提取：取任意新鲜的细胞或组织，用抽提试剂盒(推荐R0024/R0026/R0027 动物RNA抽提试剂盒(离心柱式))或Trizol法提取RNA (R0011、R0016)，作为carrier RNA。每个病毒样品需要 2-5µg carrier RNA， 直接添加至裂解液中即可。
b. 细胞样品的准备。
收集50-100万左右带有病毒的细胞。对于悬浮细胞， 1000-2000×g离心1分钟后弃上清，加入300μl裂解液，轻轻吹打8-10次至 固悬物溶解、溶液澄清；对于贴壁细胞， 吸净培养液后加入300μl裂解液，轻轻吹打5-10次至固悬物溶解、溶液澄清， 转移至 一洁净离心管内。
c. 组织样品的准备。
取15-20mg带有病毒的动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入600μl裂解液。也可将组织置于1.5ml离心管中，迅速加入 600μl冰浴预冷的裂解液，用微型电动匀浆器匀浆，或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后， 轻轻吹打匀浆液8-10次， 室温放置3-5分钟。然后约14,000×g离心2分钟，将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组 织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。
注意：细胞的数量一般不超过500万，不超过100万细胞宜使用300μl裂解液，多于100万细胞宜使用600μl裂解液。动物组织的用 量一般不超过30mg，用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。组织样品在裂解和离心后， 离心管下部可能会有一些胶状物质， 宜作为上清转移至下一步操作。如果弃除胶状物， 会导致得率下降约30-50%。后续加入结合液后胶状物会消失。离心是为了去除 未匀浆充分的明显块状物。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品， 裂解液中宜添加 DTT至终浓度为40mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。
2. 加入等体积(指病毒样品和裂解液的总体积)结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
3. 将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内， 12,000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
注意：当裂解液的体积大于300µl时， 在加入等体积结合液后，总体积会超过纯化柱的容量，这时应分成2次过柱，即将一半的混 合物过柱后，再将剩余的混合物重复步骤3一次。对于一些特殊的样品，如出现溶液未完全通过时， 可延长离心时间至1-2分钟， 或者加大离心力至16,000×g。对于一些能快速启动达到12,000×g的离心机，离心30秒已经足够，对于一些启动速度缓慢的离心 机本步骤及后续步骤中的30秒离心宜调整为60秒。
4. 加入600µl洗涤液I， 12,000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
5. 加入600µl洗涤液II， 12,000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
6. 重复步骤5一次。
7. 最高速(约14,000-16,000×g)离心2分钟，去除残留的液体。
8. 将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中，加入30-50µl洗脱液，室温放置2-3分钟，最高速离心30秒，所得溶液即为纯
化的病毒RNA样品。样品病毒RNA提取量可能会较少， 用紫外分光光度计较难测出，建议用qRT-PCR法检测(推荐使用我司生产的D7277 BeyoFast™ Probe One-Step qPCR Mix或者D7268 BeyoFast™ SYBR Green One-Step qRT-PCR Kit)。不同数量的 新冠病毒N基因慢病毒保存在含咽拭子的病毒样品常规保存液(R0143)中，用本试剂盒提取病毒后使用新型冠状病毒(2019-nCoV) 双荧光qRT-PCR试剂盒进行检测，此处的病毒量为每个PCR反应体系中病毒的IU数。
| Amount ofvirus (IU/Reaction) | 400 | 40 | 4 | |
|
Ct Value | Replicate 1 | 24.58 | 27.93 | 32.19 |
| Replicate 2 | 25.07 | 28.27 | 31.58 | |
| Replicate 3 | 25.21 | 28.05 | 31.73 | |
| Average | 24.95 | 28.09 | 31.84 | |
注意：洗脱液需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20µl，但洗脱下 来的RNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心 洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。
