产品分类/PRODUCT CLASSIFICATION
人类嗜T淋巴细胞病毒1型（HumanT-lymphotropicVirus1HTLV1）是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的RNA病毒，在体内主要感染CD4+T淋巴细胞可引起成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV相关脊髓病（HTLV-Iassociatedmyelopathy，HAM/热带痉挛性下肢瘫，tropicalspasticparaparesisTSP）及色素层炎（uveitis），主要通过输血、针头、性行为、母子传染。HTLV-I病毒是艾滋病毒（HIV-I)的远亲，但HTLV-I和艾滋病的发生没有任何关连。目前各捐血中心以酵素免疫法全面筛检HTLV-I病毒。本产品就是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2.引物和探针经过优化，分析灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据HTLV病毒1型高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5.可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6.本产品足够50次 20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
| 成分 | 编号 | 五孔盒包装 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 190504a | 500μL（白盖） |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 190504b | 100μL（红盖） |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 180701 | 1mL（绿盖） |
| HTLV病毒1型探针法qRT-PCR 引物-探针混合液 | 15-87810yp | 150μL（棕色管） |
| HTLV病毒1型探针法qRT-PCR 阳性对照(1×10E7拷贝/μL) | 87810pc | 50μL（黄盖） |
| 使用手册 | 15-87810sc | 1份 |
本产品只能用于科研。
运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂样品RNA，超纯水。
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2.用带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。
3.在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的 标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在4号管中加入5μL1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品RNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的是PC（样品制备阳性对照）和NC（样品制备阴性对照）。可以取阳性对照的1000倍稀释液10μL再加上一定量的水，使总体积与待提取样品的规定体积一致，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒RNAout或免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记 N+9个 RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个 RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于 RT-PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分/每管 | 样品管 N+2个 | RT-PCR 阴性对照 | 标准曲线样品管 （1-6管） |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| HTLV病毒1型探针法qRT- PCR引物-探针混合液 | 3μL | 3μL | 3μL |
| N+2个待测RNA样本 | 5μL | 不加 | 不加 |
| 自备超纯水 | 不加 | 5μL | 不加 |
| 第6步所得标准曲线样品稀释液 （1-6号） |
不加 |
不加 | 5μL（1号样到 1号管，2号样 到2号管…） |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 20min |
| 预变性 | 95℃ | 10min |
| RT-PCR反应 （45个循环） | 95℃ | 15sec |
|
| 60℃ | 1min（采集FAM通道的荧光信号） |
