上海细胞库
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| CBP60698 | |
| I. General information YAPC（人胰腺腺癌细胞） | |
| Synonyms: | |
| Background: | established from ascites obtained during exploratory laparatomy of a 43-year-old Japanese man with pancreas carcinoma (terminal, no therapy) in December 1993; cells were described as being dependent on autocrinely secreted IL-1alpha |
| Species: | human (Homo sapiens) |
| Tissue: | pancreas |
| Disease: | pancreas carcinoma |
| Gender: | N/A |
| Morphology: | cobblestone-like adherent cells growing in monolayers; |
| Growth Mode: | N/A |
| Doubling Time: | ca. 48 hours |
| DNA Profile: | N/A Cell Line Authentication Service |
| Culture Medium: | RPMI1640+10%FBS We strongly suggest to purchase the complete medium from |
| Cryopreservation medium: | 90%FBS+10%DMSO |
| Mycoplasma: | negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization, PCR assays |
| Immunology: | cytokeratin +, cytokeratin-7 +, cytokeratin-8 +, cytokeratin-17 (+), cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -, neurofilament -, vimentin (+) |
| Fingerprint: | multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile |
| Species: | confirmed as human with IEF of AST, NP |
| Cytogenetics: | human near-triploid karyotype with 8% polyploidy - 66-71<3n>XXYY, +3, +7, +8, +9, +10, +14, -17, -18, -19, -20, -22, -22, -22, +3mar, der(1)del(1)(q23-25)inv(1)(p11q21), der(1;5)(q10;q10), add(3)(p11)/del(3)(p11p21)x2, del(5)(p11), add(6)(p21), del(7)(q32), add(9)(p1?), der(9;15)(q10;q10), der(10)t(10;11)(p11;q13)x2, del(12)(p12), add(13)(p11)x2, add(13)(p11), inv(16)(p13q11.2), del(18)(q21), add(20)(p11)/der(20)t(1;20)(p34;p11) - loss of 1p, 3p, 9p, 18q associated with pancreas carcinoma - matches published karyotype |
| Virus | ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HIV-1 -, HIV-2 -, HTLV-I/II -, MLV -, SMRV - |
培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2. 对于贴壁的细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中的多余培养基，至剩余5-8mL左右，随后将细胞置于含有5%CO的37℃恒温 培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶请立即传代。
3. 对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于含有5% CO 的37℃恒温培养箱中培养。
冻存细胞操作步骤
注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用将细胞置于含有5%CO 的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养
1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。
3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。
4. 离心
5. 将细胞置于含有5%
传代比例：建议 1:2 （以培养瓶底面积计算）
培养基换液: 每隔 2 至 3 天。
