柑橘黄龙病菌亚洲种PCR试剂盒-上海雅吉生物科技有限公司

产品及特点 柑橘黄龙病菌亚洲种（Candidatus Liberobacter Asiaticus）是一种类菌体，柑橘感染黄龙病后，全年均可发生，一般以夏梢和秋梢发病最多，其次是春梢。新梢的症状是叶片表现黄化和黄绿相间的斑驳。在叶片凋落后，枝梢上新长出的叶片表现缺素状的花叶。病梢变短、生势衰弱，病叶黄厚、变小，且易脱落，形成枯枝。开花不适时，花开的多、落得多。果小而畸形，或红鼻果。后期，根部往往表现为小根腐烂。此菌可以侵染芸香科柑橘属和金橘属植物，引发症状。通过菟丝子，此菌可以侵染长春花。在自然界，芸香科蚝壳刺属和木苹果属植物可能受此菌侵染，九里香属植物常见着生大量传播柑橘黄龙病的柑橘木虱，但其体内未见病原菌。

本产品是根据 PCR 原理开发的柑橘黄龙病菌亚洲种的检测试剂盒，它具有下列特点：

1.即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩柑橘黄龙病菌亚洲种，与其他病原没有交叉反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5.本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装

PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（红盖）

超纯水 100935 1 mL（亮黄色）

柑橘黄龙病菌亚洲种 13-5300yw 100 μL（白盖）

PCR 引物混合液

柑橘黄龙病菌亚洲60908-5300pc 50 μL（黄盖）

种 PCR 阳性对照

（1×10E8 拷贝/μL）

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 柑橘黄龙病菌亚洲种 PCR 阳性对照的 10000

倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板DNA 放冰上待用。

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3.对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个	PCR 阴性	PCR 阳性
成分	样品管	对照	对照
	样品管	对照	对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL

柑橘黄龙病菌亚洲种	各 2 μL	2 μL	2 μL
PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
PCR 引物混合液
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-

PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-

PCR 阳性对照（柑橘黄龙
病菌亚洲种 PCR 阳性对	-	-	18 μL
照的 10000 倍稀释液）

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间

预变性	95℃	5 min

PCR 反应	95℃	30 sec

	55℃	30 sec
（35 个循环）	55℃	30 sec

	72℃	30 sec
	72℃	30 sec

最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测

3.取 10-20 μL PCR 产物。2%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有 237bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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