多重荧光免疫组化染色试剂盒（组合系列）-上海雅吉生物科技有限公司

组织微环境中有复杂的细胞组成，这些细胞的表型、状态、丰度、分布都有着重要的生物学意义和临床价值。借助抗体染色可以将其在组织原位上呈现出来。免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的常见技术，常规IHC检测只能展示单一指标，难以呈现复杂的组织微环境中的细胞组成、状态和关系，而这些信息对疾病的诊断和治疗至关重要！

酪氨信号放大技术原理：类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采用HRP标记的二抗，HRP催化加入体系的荧光素底物，生产活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，使样品上稳定的共价结合荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的抗体，在换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。
产品组分：*表示可选组分，下单前需要确认备注到订单

名称	规格(100T)	保存温度	激发波长（nm）	发射波长（nm）
SuperNova488（200x）*A	50ul	-20℃	490	515
SuperNova532（200x）*B	50ul		527	558
SuperNova555（200x）*C	50ul		555	565
SuperNova594（200x）*D	50ul		593	614
SuperNova620（200x）*E	50ul		617	639
SuperNova640（200x）*F	50ul		642	662
SuperNova680（200x）*G	50ul		681	698
DAPI（100*母液）	100ul	2-8℃	360	461
信号放大液	NA
羊抗小鼠二抗(三选一） *H	NA
羊抗兔二抗（三选一） *I	NA
鼠兔通用二抗（三选一）*J	NA
抗荧光淬灭封片剂	5mlx2

应用

主要用于人源或小鼠组织、石蜡切片、TMA芯片的免疫组化染色。

使用方法

样本要求：
1. 福尔马林固定的蜡块或玻片，大块组织或TMA，封蜡不能有明显的破损。
2. 玻片样本，组织需要紧贴玻片，避免褶皱，玻片不能有破损、划伤或污渍。
3. 组织最小应包含大于1000 个细胞。
4. 蜡块需包埋实体瘤组织，坏死瘤组织、细针穿刺物、细胞甩片样品会影响染色效果。
5. 组织应当用10%中性福尔马林固定，正常固定时间为18～24 小时。
6. 切片厚度为4um 左右，使用防脱玻片。建议玻片在固定后一周内制备为佳。
7. 不要在水浴捞片环节添加任何粘合剂，样本应置于玻片正面、中央。将捞片竖直置于吸水纸上去除水分，轻敲去除水滴。
8. 切片后玻片置于40℃干燥箱上放置30min，确保水分去除、贴片牢固。

试剂准备：
1) TBST 洗液：25 mM TRIS-HCl （pH 7.5），150 mM NaCl，0.05% Tween®20 (v/v)
2) 抗原修复液：根据一抗选择柠檬酸钠或者EDTA修复液
3) 抗体稀释液：可做抗体稀释和封闭使用，即用型
4) 一抗工作液：现用现配，根据预实验条件优化浓度
5) 二抗工作液：二抗工作液为HRP-羊抗鼠兔或兔双抗
6) 荧光染料染色工作液：系列单色荧光染料为200X 母液，使用前用TSA 信号放大反应液1:
200 稀释用配好的工作液4℃保存，仅限当天使用。
7) DAPI 工作液：DAPI 使用无菌水按1：100稀释制备工作液

操作步骤：建议采用实验操作表格进行记录
1. 样品脱蜡准备：
a) 温箱设置到55℃-60℃，烤片1h 以上。
b) 新鲜二甲苯浸片10min，重复3 次。
c) 梯度乙醇浸片：100% 3min；95% 3min；70% 3min。
d) 灭菌水洗片1min，重复3 次。
2. 多重荧光免疫组化染色步骤(A、B、C 三种抗体为例) ：
A 抗体
A.1 抗原修复：把1X 抗原修复液倒入修复杯中微波炉高火加热3min 煮沸，立刻放入切片，低火（约20%功率）继续加热15min 后冷却至室温。进行该步骤之前建议不放样品进行一次预实验，检测15min 后液面是否高于样品，避免干片，抗原修复液不能2 次使用。
A.2 封闭：去除玻片上残存洗液，用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加抗体稀释液/封闭液，覆盖样本区域，室温孵育10min。
A.3 一抗孵育：用抗体稀释液按照推荐比例稀释A 抗体，去除玻片上的封闭液，加一抗至完全覆盖样本，室温孵育30min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
A.4 二抗孵育：去除玻片上残存的洗液，滴加羊抗鼠兔HRP 标记二抗抗体，浸没样本区域，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
A.5 荧光染色放大信号：去除玻片上残存的洗液，滴加荧光染料染色工作液，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
A.6 微波修复：把1X 抗原修复液倒入修复杯中微波炉高火加热3min，立刻放入切片，低火（约20%功率）继续加热10min 后冷却至室温。
B 抗体
B.1 封闭：去除玻片上残存洗液，用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加抗体稀释液/封闭液，覆盖样本区域，室温孵育10min。
B.2 一抗孵育：用抗体稀释液按照推荐比例稀释B 抗体，去除玻片上的封闭液，加一抗至完全覆盖样本，室温孵育30min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
B.3 二抗孵育：去除玻片上残存的洗液，滴加羊抗鼠兔HRP 标记二抗抗体，浸没样本区域，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
B.4 荧光染色放大信号：去除玻片上残存的洗液，滴加荧光染料染色工作液，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
B.5 微波修复：把1X 抗原修复液倒入修复杯中微波炉高火加热3min，立刻放入切片，低火（约20%功率）继续加热10min 后冷却至室温。
C 抗体
C.1 封闭：去除玻片上残存洗液，用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加抗体稀释液/封闭液，覆盖样本区域，室温孵育10min。
C.2 一抗孵育：用抗体稀释液按照推荐比例稀释C 抗体，去除玻片上的封闭液，加一抗至完全覆盖样本，室温孵育30min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
C.3 二抗孵育：去除玻片上残存的洗液，滴加羊抗鼠兔HRP 标记二抗抗体，浸没样本区域，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
C.4 荧光染色放大信号：去除玻片上残存的洗液，滴加荧光染料染色工作液，室温孵育10min，用1X TBST 浸洗玻片3 次，每次2 分钟。
C.5 微波修复：把1X 碱性抗原修复液倒入修复杯中微波炉高火加热3min，立刻放入切片，低火（约20%功率）继续加热10min 后冷却至室温。
每轮染色结束后可用荧光显微镜确认染色情况，注意用TBST 覆盖样品，防止干片。
3. DAPI 复染及封片：
去除玻片上残存洗液，滴加DAPI 工作液，室温孵育5min，用1X TBST 浸洗玻片2 分钟，用灭菌水洗片2 分钟，在样品上滴加适量抗淬灭封片剂，加盖玻片，小心排除气泡，用透明指甲油封住盖玻片四周，室温晾干，4℃ 避光保存。
4. 成像：
选用成像设备按照染料光谱条件设置拍摄条件，对染色后的组织片在荧光显微镜下数据并进行
判读分析。

是否允许进口

允许

是否危险品

非危险品

性能

供应商

Absin

存放说明

荧光染料需避光保存，按说明书要求，收到货起有效期为12个月。

参考文献

1.Dabbs David J. 诊断免疫组织化学(M). 北京：北京大学医学出版社，2008.9. 2.【美】Ed Harlow, David Lane. 抗体技术指南(M). 北京：科学出版社，2002:79-80,105. 3.Stack, E. C., et al., Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods, 2014 70 (1): 46-58. 4.钱帮国. 焦磊. 多标记免疫荧光染色及多普成像技术在组织学研究中的应用. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2017 (4): 373-382.

声明：本官网所有报价均为常温或者蓝冰运输价格，如有产品需要干冰运输，需另外加收干冰运输费。

上海细胞库

原代细胞

细胞培养

细胞服务

酶联试剂盒

生化试剂盒

PCR试剂盒

抗体蛋白

试剂耗材

首页 > 抗体蛋白 > 免疫组化

产品详情

联系我们