pBM21快速克隆试剂盒为一种阳性选择克隆系统,克隆区域位于pBM21质粒的**基因(lethal gene)内部。当连接产物转化大肠杆菌后,有外源片段的插入的重组质粒导致载体上的**基因功能丧失,细菌存活,无片段连接(载体自连)时,**基因表达的毒蛋白使细菌不能存活。该试剂盒利用T4 DNA 连接酶(T4 DNA ligase)的连接活性将平末端DN**段克隆到具有磷酸化末端的线性化载体pBM21中。
适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物或各种方法产生的平末端双链DN**段。由Taq、Tth和klenTaq等DNA聚合酶扩增的非平末端PCR产物,可通过平末端化酶(Blunting Enzyme)处理成为平末端DNA用于连接。阳性克隆可以用试剂盒提供的引物PBM21F和PBM21R进行菌落PCR或测序鉴定。
产品特点:
1、连接反应仅需5-30分钟;
2、适用于平末端PCR产物和平末端双链DN**段;
3、适用于磷酸化或非磷酸化的DN**段;
4、pBM21为氨苄抗性,具高拷贝复制起始子。
产品信息:
组分 | 数量20T | 数量20T×3 |
pBM21 Vector (40ng/ul ) | 20ul | 20ul×3 |
2×T4 DNA ligase master mix | 100ul | 100ul×3 |
Blunting Enzyme | 20ul | 20ul×3 |
Control Insert | 5ul | 5ul |
PBM21F Primer | 0.1OD | 0.1OD ×3 |
PBM21R Primer | 0.1OD | 0.1OD ×3 |