包装:5ml(可用于50张片子)
适用:一抗来源于小鼠或兔子
显色底物:DAB (联苯二胺)
试剂组成:
组分编号 | 组分名称 | 规格 | 数量 |
A | 过氧化氢 | 5ml | 1 |
B | 超级封闭液 | 5ml | 1 |
C | 一抗放大剂 | 5ml | 1 |
D | 酶标二抗聚合物 | 5ml | 1 |
E | DAB A液 | 5ml | 1 |
F | DAB B液 | 160ul | 1 |
未提供但必需试剂:一抗(来源于小鼠或兔子)、PBS (磷酸盐缓冲液)
本试剂盒是基于聚合物技术的最新一代免疫组化二抗非生物素检测系统,信号更强、操作更加简单。 与传统的免疫组化二抗试剂盒相比,具有3个特点:一是由于聚合物的独到之处,使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度敏感性,有效减少了一抗使用量,一抗试剂可再稀释2-4倍;二是由于避免了生物素的使用,从而可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色,得到更清晰的显色和更干净的背景;三是快速,更短的试剂孵育时间。
储存及有效期
2-8°C保存。每个组分至少可以保存18个月。
操作步骤:
说明:所有的步骤在室温下操作,加试剂可以直接滴瓶滴定,也可以用移液器,一滴=30-40ul
1. 脱蜡、水化组织切片
2. PBS洗2-3次各5分钟
3. 根据所应用的一抗的特殊要求,对组织切片进行预处理
4. PBS洗2-3次各5分钟
5. 加入100ul A 液孵育十分钟,阻断内源性过氧化物酶,以减少非特异性背景染色
6. PBS洗2-3次各5分钟
7. 加入100ul B 液孵育五分钟来减少非特异性染色。注意:此步骤不要超过十分钟;如果一抗在含有5%至10%正常山羊血清的缓冲液中稀释,则此步骤可以省略
8. PBS洗2-3次各5分钟
9. 加一抗,室温或37℃孵育20分钟
10. PBS洗2-3次各5分钟
11. 加入100ul C 液孵育十分钟
12. PBS洗2-3次各5分钟
13. 加入100ul D 液孵育十分钟.注意:此液对光敏感,注意避光
14. PBS洗2-3次各5分钟
15. 配制新鲜底物液:将30ul的 F 液和1ml的 E 液充分混合,即配制成新鲜底物液(该底物液可存放2周)
16. 加入100ul新鲜底物液, 孵育五分钟
17. 去离子水冲洗
18. 复染,封片