使用说明
1. 成骨诱导分化操作
1.1 明胶包被培养器皿
干细胞培养较长时间后，可能会出现脱壁卷边或漂浮现象，建议使用0.1%明胶溶液对培养器皿进行包被。准备合适的培养器皿，取适量明胶覆面，37°C静置30 min，吸取晾干即可使用。
1.2 接种干细胞
取对数生长期的细胞， 按 照 2.0×10e4cells/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中，于 37℃，5% CO2 培养环境下培养至汇合度60~70%，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。
1.3 细胞分化诱导
于37℃，5% CO2培养环境下培养约14~21天，每2~3天换液一次，并注意观察细胞形态变化。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。
2. 染色鉴定
2.1 细胞固定
吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~60 min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。
2.2 茜素红染色
加入适量茜素红染色液染3~5 min，吸走茜素红染色液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS避免细胞干燥。
2.3 诱导评估
显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。
NOTE: 干细胞的成骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。
