注意事项
1.对不稳定 DNA 片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建,涂板后平板应在 30℃培养,以减少发生
错误重组的概率。
2.制备高纯度病毒质粒时,应使用新鲜转化的平板接菌,新鲜菌液提取质粒,菌液不可低温保存后使用。
3.对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存,尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。
4.S.O.C.或 LB 培养基均可使用,S.O.C.可提高转化效率 20%;实验人员可选择在 37℃或 30℃培养细胞,
37℃条件下,菌生长速度加快,有利于提高质粒产量,30℃培养可降低错误重组概率。
5.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA,不可在冰中放置时间过长,长时
间存放会降低转化效率。混入目的 DNA 时应轻柔操作。
6.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。